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31901 TranscriptMax T7 High Yield RNA Synthesis Kit

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31901 TranscriptMax T7 High Yield RNA Synthesis Kit

  • 规 格:
    • 25 T
    • 50 T

货 号:

31901-01


价 格:

¥ 0

¥ 1368


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产品概述

产品描述

TranscriptMax T7 High Yield RNA Synthesis Kit 是基于 T7 RNA 聚合酶的高效 RNA 体外转录试剂盒。该试剂盒中含有 T7 RNA 聚合酶、反应缓冲液、核苷酸混合液等经过优化的试剂,可以将含有 T7 启动子的 DNA 模板高效转录成 RNA。本试剂盒可应用于制备 guide RNA、RNA 标准品等。

 

 

产品组分

组分

31901-01(25 T) 

31901-02(50 T) 

 5 × TranscriptMax Reaction Buffer

100 μL 200 μL

 NTP mix

200 μL 400 μL

 TranscriptMax Enzyme Mix 

55 μL 110 μL

○ DEPC-treated Water 

250 μL 250 μL

 Positive Control Template a 

50 μL 50 μL

a. Positive Control Template 是阳性对照,可作为转录模板使用,用来测试体外转录体系的反应效率。在 37℃孵育30 min 条件下,对照转录反应体系生成的转录 RNA 产量≥50 μg,其产量在纯化后由 NanoDrop 测定。

 

 

保存条件

-20℃保存,有效期 1 年。

 

 

实验流程

1.T7 RNA 转录原理示意图

T7 RNA 转录原理示意图如图 1 所示。

 

2.DNA 转录模板类型

2.1 质粒模板

带有 T7 启动子的质粒可以作为转录模板,但是质粒必须要线性化,可通过限制性核酸内切酶或 PCR 扩增的方法将质粒线性化。质粒线性化后,将纯化后的产物作为模板,每个反应体系建议加入 1 μg 的线性化质粒作为模板进行体外转录。

2.2 PCR 产物模板

带有 T7 启动子的 PCR 产物可以作为转录模板。需要通过电泳确定 PCR 产物的特异性和浓度,一般在 20 μL 的体外转录体系中加入 2-5 μL 的 PCR 产物作为模板。

2.3 合成的DNA模板

带有 T7 启动子的合成 DNA 片段可以作为转录模板。一般将合成的 T7 oligo 和 T7 oligo 反向互补的模板链退火后作为模板,每个反应体系建议加入 0.25 μM-1 μM 的退火产物作为模板。

 

3.体外转录反应

3.1 按下表试剂的顺序进行反应体系的配制。

组分

体积 

5 × TranscriptMax Reaction Buffer

4 μL

NTP mix

8 μL

TranscriptMax Enzyme Mix 

2.1 μL

DEPC-treated Water 

5.9 - x μL

DNA 转录模板

x μL

· 请将试剂解冻并完全混匀后再使用。
· 5 × TranscriptMax Reaction Buffer 中含有亚精胺,而亚精胺与核酸容易形成复合体沉淀,DNA 转录模板尽量最后加入到体系中。
· 上述反应体系的总体积为 20 μL,可适当等比例调整反应体系。

3.2 将上述试剂充分混匀,然后短暂离心,在 37℃下孵育 0.5-1 h 进行体外转录。

3.3 37℃孵育结束后,后续进行转录产物的纯化推荐使用 Tolo RNAclean Kit (#36201) ,该试剂盒具有彻底去除 DNA 模板残留,操作简便等特点。

 

 

注意事项

1. 使用质粒作为转录模板的时候,质粒必须要进行线性化处理,否则转录的产物会出现长度大小不一的情况。

2. 转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。例如模板 DNA 中混入 RNase、EDTA、NaCl 等高盐溶液均可显著抑制体外转录反应,导致 RNA 合成量减少。

3. 实验过程应选用无核酸酶的枪头和离心管。

常见问题解答

产品说明书

#31901 TranscriptMax T7 High Yield RNA Synthesis Kit

pdf

573.2KB

参考文献

COA查询

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