31203 CRISPR Single-Target Nucleic Acid Test Strip
产品概述
■ 产品描述
本产品为CRISPR单系统侧向层析试纸条 (CRISPR Single-Target Nucleic Acid Test Strip)，有两个条带，靠下的质控线（C线）和靠上的检测线（T线）。在C线处包被有亲和素（SA），T线处包被有羊抗鼠二抗，胶体金上标记抗FITC/FAM单抗。完整的CRISPR系统探针（一端标记Biotin，另一端标记FAM或FITC）可使胶体金全部被捕获在C线处，当有探针被Cas酶切断时，与切断片段结合的胶体金不能被C线捕获，形成T线。通过T线的有无判断Cas酶是否被激活，且T线的亮度与被切割探针的比例（即Cas酶的切割活性）呈正相关。CRISPR系统单链DNA探针推荐使用本公司HOLMES-LFA ssDNA reporter 1（FAM/Biotin，货号#31201）；单链RNA探针推荐使用本公司HOLMES-LFA ssRNA reporter 1（FAM/Biotin，货号#31202）。
图1. 一次性CRISPR单系统试纸条结构示意图
■ 产品组分
| 组分 | 31203-01 (筒装) | 31203-02 (筒装) |
| CRISPR Single-Target Nucleic Acid Test Strip | 20 条 | 50 条 |
■ 保存条件
常温、干燥储存，常温运输；有效期12个月。
■ 实验流程
1. 操作步骤
a）取出所需数量的试纸条，做好标记。
b）取CRISPR反应产物50 μL或稀释后的产物50 μL加入到PCR管中。
c）插入试纸条，样品垫端朝下，常温下放置5-10分钟后判读结果。
d）使用完毕后，将扩增产物和试纸条装进密封袋，妥善处理。
2. 结果判读
图2. 结果判读示意图
a）阳性(﹢)：
C线显色，T线肉眼可见，判为阳性，表示部分核酸探针被Cas酶切割；
C线不显色，T线肉眼可见，判为阳性，表示核酸探针几乎被Cas酶切割完毕。
b）阴性(－)：
C线显色，T线不显色，表示核酸探针未被Cas酶切割。
c）无效：
C线和T线均不显色，表明操作失误或试纸条已变质失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并重新测试。
常见问题解答
Q1：荧光探针与试纸条探针能否互相替代？
A1：不能，标记的基团不同，原理上不兼容。
Q2：是否可以刚开始CRISPR反应，就插入试纸条？
A2：不可以，需等CRISPR反应结束后再插入试纸条，CRISPR反应时间需要自行实验探索（可用荧光法探索），反应结束后若总体积不满50 μL，需要补水至50 μL后再插入试纸条。插入试纸条后5-10 min判读。
Q3：使用试纸条时，探针应该加多少量？
A3：探针总添加量不宜超过 20 pmoL，否则可能使C线包被的亲和素不足以捕获所有完整的探针，导致假阳性结果。探针总添加量不能低于1 pmol，否则可能导致胶体金过剩而直接随液体扩散至T线显色（比如试纸条直接插到水里面T线就会显色）。
Q4：试纸条的哪一端是样品垫？
A4：印有箭头的一端为样品垫。样品溶液不得超过样品垫，否则试纸条中的胶体金可能直接扩散至样品溶液中，而不随试纸条层析扩散。
参考文献
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