31201 HOLMES-LFA ssDNA reporter 1（FAM/Biotin）
产品概述
■ 产品简介
HOLMES-LFA ssDNA reporter 1（FAM/Biotin）是单链DNA寡核苷酸探针，5′端标记FAM，3′端标记Biotin。当该产品与CRISPR单系统试纸条（#31203）联用时，完整的未被切断的探针可使胶体金全部被捕获在质控线（C线）处；若探针全部或部分被Cas酶剪切，与切断片段结合的胶体金不能被C线捕获，形成检测线（T线），且T线的亮度与被切断探针的比例呈正相关。常见的Cas12a、Cas12b和Cas12f在与guide RNA、target DNA组成三元复合物后，都能启动针对非特异序列单链DNA的剪切，因此HOLMES-LFA ssDNA reporter 1（FAM/Biotin）可以作为Cas12家族蛋白的剪切底物。HOLMES-LFA ssDNA reporter 1（FAM/Biotin）探针经过特别的序列优化，对Cas12a、Cas12b和Cas12f等蛋白的剪切高度敏感。
■ 产品组成
| 组分 | 31201-01 |
 HOLMES-LFA ssDNA reporter 1 (FAM/Biotin) a |
1 OD |
a. HOLMES-LFA ssDNA reporter 1（FAM/Biotin）总量为1 OD (约为8.42 nmol)，为干粉状态。使用前请先短暂离心，然后加入84.2 μL Nuclease-Free water溶解，得到浓度为100 μM的贮存液，在无反复冻融的条件下可于-80℃避光保存6～12个月。使用前再将贮存液用Nuclease-Free water稀释成10 μM的工作液，按下表推荐的浓度加入CRISPR剪切反应体系中，剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6个月内使用。
■ 保存条件
-20℃避光储存；≦4℃运输。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系，以LbCas12a为例
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12a (#32042) | 2 μL | 1 × |
| 10 µM LbCas12a Nuclease | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM crRNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Target ssDNA或dsDNA | x μL | 25~250 nM |
| 10 µM HOLMES-LFA ssDNA reporter 1 (FAM/Biotin) | 0.1~1 μL | 50~500 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
● 如按照上表配制20 μL总反应体积，插入试纸条前需要补充30 μL Nuclease-free water至总体积为50 μL；也可等比例放大上述体系至总体积为50 μL（请注意探针投入量需要根据搭配试纸条的载量适当调整，如搭配ToloBio #31203 CRISPR单系统试纸条，则探针投入量不能低于其载量下限，也不能高于载量上限），50 μL体系反应结束后可直接插入试纸条。
反应温度和反应时间可根据不同Cas酶的活性和反应最适温度进行设定。
常见问题解答
参考文献
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