31191 HOLMES-Fluo dsDNA reporter 1 (FAM)
产品概述
■ 产品描述
HOLMES-Fluo dsDNA reporter 1(FAM)是双链DNA寡核苷酸探针，在其中一条链的5′端标记FAM荧光基团 (Fluorescence)，在另一条链的3′端标记淬灭基团 (Quencher)。当HOLMES-Fluo dsDNA reporter探针完整时，荧光基团发射的荧光信号会被淬灭基团淬灭。而当HOLMES-Fluo dsDNA reporter探针被切碎后，双链DNA会解离，从而使得FAM荧光基团和淬灭基团分离，发出荧光信号。除直接检测荧光信号外，针对HOLMES-Fluo dsDNA reporter探针切割的反应，也可对反应体系通过溶解曲线的方法进行切割产物的分析。当使用溶解曲线法分析切割产物时，Tm值的降低或峰型的消失则表示dsDNA reporter探针被切割或切碎，其中被切割或切碎的比例与对照组特征峰的减少量呈正相关。HOLMES-Fluo dsDNA reporter 1 (FAM)对Cas12a2的dsDNA剪切活性敏感。
■ 产品组分
| 组分 | 31191-01 |
 HOLMES-Fluo dsDNA reporter 1 (FAM) (10 μM) a |
100 μL |
a.HOLMES-Fluo dsDNA reporter 1 (FAM)总量为100 μL液体。使用前请先短暂离心，在无反复冻融的条件下可于-20℃避光保存12个月。dsDNA探针禁止高温加热，否则会破坏双链结构，影响使用效果。
■ 保存条件
-20℃避光储存；≦4℃运输。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系（以SuCas12a2为例）
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12a (#32042) | 2 μL | 1 × |
| 10 µM SuCas12a2 Nuclease (#32122) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM crRNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM Target DNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM HOLMES-Fluo dsDNA reporter 1 (FAM) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
于37℃反应，并通过实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，每30 sec或1 min采集一次荧光信号。
HOLMES-Fluo dsDNA reporter 1 (FAM)适用于能以dsDNA为反式剪切底物的CRISPR体系（如Cas12a2）。
常见问题解答
参考文献
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