■ 产品简介

FastClone DH5α感受态细胞是一种可用于免复苏快速转化的高效化学感受态细胞，是实验室较为常用的大肠杆菌菌株之一，广泛用于基因克隆、蓝白斑筛选、质粒稳定扩增等分子生物学实验。该菌株缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA) 减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15是表达β -半乳糖苷酶α片段的一段基因，当M15缺失(△M15)时，lacZ基因虽然能表达ω片段，但不能表达α片段，β -半乳糖苷酶没有活性。当带有lacZ(α片段)基因的lac操纵子通过载体DNA(如pUC19)转化到lacZ△M15基因型的感受态(如DH5α)时，在有IPTG (异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情况下，IPTG作为乳糖的类似物与lacI阻遏蛋白结合而使lac操纵子不被抑制，从而利用α-互补性产生完整的β -半乳糖苷酶，β -半乳糖苷酶可分解底物X-gal (半乳糖类似物)，使其呈现蓝色。因此，FastClone DH5α感受态可用于蓝、白斑筛选。使用pUC19质粒进行热激活转化，转化效率可以高达1×10⁸ cfu/μg DNA以上。

■ 产品优势

● 高转化效率：>1×10⁸ cfu/μg DNA
● 适用于免复苏快速转化

■ 产品组成

基因型: F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1 hsdR17(rk^- mk⁺) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 λ-

■ 存储条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存!

■ 使用方法

快速转化流程

1. 解冻感受态细胞：从-80 ℃取出感受态细胞，冰上融化约5-10 min，然后立即进行DNA样品的转化。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态可加入0.5-10 μL待转化DNA样品（例如质粒、连接产物或重组产物等），然后轻轻弹击管底约5-6次，立即冰上静置孵育1 min。

• 待转化DNA样品的加入体积不宜超过感受态细胞体积的1/10。

• 加入待转化DNA样品后应轻柔弹击混匀，避免使用移液枪剧烈吹打混匀。

3. 热激处理：冰浴后，将装有感受态和DNA样品的的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激45 s。随后立即转移至冰上静置1 min以快速冷却。

• 热激及转移至冰浴过程中禁止晃动离心管。

4. 涂板培养：

（a）若转化质粒携带Amp（氨苄青霉素）或Chl（氯霉素）抗性，则转化后的感受态可以免复苏，直接取 50-100 μL涂布于对应的抗性板上；

（b）若转化质粒携带其它抗性，例如Kan（卡那霉素）、Spec（壮观霉素）等，则建议加入900 μL 无抗LB 培养基，将离心管倾斜放置在恒温摇床中，37℃ 220 rpm复苏20 min，再取适量的菌液（如 50-200 μL）涂板，或5000 g，1 min室温离心，吸弃约900 μL上清，然后用剩余的约100 μL重悬菌液，涂布于对应的抗性板上。

• 37℃为常规复苏温度，若转入质粒对温度敏感或其它特殊情况需根据实验要求设置合适的温度。

5. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

• 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

• 37℃为常规培养温度，若转入质粒对温度敏感或其它特殊情况需根据实验要求设置合适的温度。

■ 相关参数