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V32118S AapCas12b (C2c1) Nuclease（冻干球-单反应）
产品概述
产品描述
AapCas12b 核酸酶(又名 C2c1)是由 tracrRNA-crRNA(或 sgRNA)介导的 DNA 核酸内切酶，在靶标双链 DNA 存在 PAM (TTN) 序列的情况下，特异地剪切靶标双链 DNA，使 DNA 双链断裂并生成粘性末端。而 AapCas12b 特异地剪切单链 DNA 靶标不依赖 PAM 序列。此外，双链或单链 DNA 靶标均能激活 AapCas12b 的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，即当 AapCas12b 酶与 sgRNA、靶标 DNA 结合形成三元 复合物后，便会被激活针对非特异序列 ssDNA 的反式剪切活性，将体系中的任意序列 ssDNA 切碎。 AapCas12b 来源于嗜酸耐热菌 Alicyclobacillus acidiphilus，最佳剪切反应温度为 60℃，因此更适用于与 LAMP 联用，开发“一步法”恒温扩增/CRISPR-Cas 检测体系。
本产品将无甘油 AapCas12b 核酸酶冻干，可用于常温运输及保存，使用配套的冻干 Cas 酶复溶液复溶 后，具有与本公司非冻干型 AapCas12b (C2c1) Nuclease（#32118）同等的反应活性。本产品包括可用于单 个反应的酶冻干粉及冻干球等多种冻干形态，满足不同下游反应体系构建的需求。
产品组分
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组分 |
V32118S-01 |
V32118S-02 |
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48 T |
96 T |
AapCas12b Lyophilized Beads(PENICILLIN VIALS)· 单个反应的冻干球中AapCas12b含量为5 pmol，建议用于20 μL CRISPR反应体系；
保存条件
本产品常温保存及运输；复溶后于-20℃储存，避免反复冻融。
实验流程
1.冰上制备如下除Cas酶外的CRISPR反式剪切反应体系 mix：
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组分 |
体积 |
终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer 1（#32005） |
2 μL |
1 × |
| 10 μM sgRNA |
0.5 μL |
250 μM |
| 1 μM Target DNA | 0.5 ~ 5 μL |
25 ~ 250 μM |
| 10 μM HOLMES ssDNA Reporter（#31101） | 0.5 μL |
250 μM |
| Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
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2.将上述 mix 20 μL混匀后加入单个反应体系的冻干球，使之溶解。
3.立即放入实时荧光定量 PCR仪检测荧光信号，60℃反应，每 30 sec采集一次荧光信号。
实验结果
注意事项
2. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
3. 本产品仅包含 Cas 酶，CRISPR 反应体系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制备，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推荐从 TOLOBIO 选购。
4. 复溶后的 AapCas12b 需在冰上配制反应体系，且使用后立即将酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一个月)。
5. 本产品仅供科研使用。
参考文献
[1] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.
特别说明
购买本产品并不代表获得吐露港的专利许可或其他知识产权许可！吐露港在大中华区拥有 Cas12 核酸检测的底层专利（中国发明专利，专利号：ZL201710573752.0；ZL201810560284.8），并通过与美国 SherlockBiosciences, Inc.交叉授权获得大中华区 Cas13 核酸检测底层技术的独占许可。如购买本产品用于商业或非科研目的，请联系 bd@tolobio.com 获得许可。
常见问题解答
参考文献
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