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V32118E AapCas12b (C2c1) Nuclease(冻干粉)

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V32118E AapCas12b (C2c1) Nuclease(冻干粉)

  • 规 格:
    • 100 µg
    • 10×100 µg

货 号:

#V32118E


价 格:

¥ 0

¥ 6650


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产品概述

产品描述 

AapCas12b 核酸酶(又名 C2c1)是由 tracrRNA-crRNA(或 sgRNA)介导的 DNA 核酸内切酶,在靶标双链 DNA 存在 PAM (TTN) 序列的情况下,特异地剪切靶标双链 DNA,使 DNA 双链断裂并生成粘性末端。而 AapCas12b 特异地剪切单链 DNA 靶标不依赖 PAM 序列。此外,双链或单链 DNA 靶标均能激活 AapCas12b 的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性),即当 AapCas12b 酶与 sgRNA、靶标 DNA 结合形成三元 复合物后,便会被激活针对非特异序列 ssDNA 的反式剪切活性,将体系中的任意序列 ssDNA 切碎。 AapCas12b 来源于嗜酸耐热菌 Alicyclobacillus acidiphilus,最佳剪切反应温度为 60℃,因此更适用于与 LAMP 联用,开发“一步法”恒温扩增/CRISPR-Cas 检测体系。

本产品将无甘油 AapCas12b 核酸酶冻干,可用于常温运输及保存,使用配套的冻干 Cas 酶复溶液复溶 后,具有与本公司非冻干型 AapCas12b (C2c1) Nuclease(#32118)同等的反应活性。本产品包括可用于单 个反应的酶冻干粉及冻干球等多种冻干形态,满足不同下游反应体系构建的需求。

 

 

产品组分

组分

V32118E-01

V32118E-02

 AapCas12b Lyophilized Beads(SCREW CAP TUBES)

100 μg

100 μg × 5

 AapCas12b Lyophilized Beads(PENICILLIN VIALS)

200 μL

1 mL

· 建议使用 150 μL 复溶液复溶一支 100 μg 的 AapCas12b 冻干粉,复溶后酶浓度为 5 μM,即 5 pmol/μL。 

 

 

保存条件

本产品常温保存及运输;复溶后于-20℃储存,避免反复冻融。

 

 

实验流程

1.冰上制备如下CRISPR反式剪切反应体系:

组分

体积

终浓度

10 × HOLMES Buffer 1(#32005)

2 μL

1 × 

5 μM AapCas12b(C2c1)Nuclease a

0.5 μL

250 μM
10 μM sgRNA

0.5 μL

250 μM
1 μM Target DNA  0.5 ~ 5 μL

25 ~ 250 μM

10 μM HOLMES ssDNA Reporter(#31101)  0.5 μL

250 μM

Nuclease-free Water

Up to 20 μL

 

a.V32108E 系列 LbCas12a 每管含有 100 μg 的 LbCas12a 冻干粉,建议每管加入 136 μL 复溶液,复溶后酶浓度为 5 μM,即 5 pmol/μL。

 

2.立即放入实时荧光定量 PCR仪检测荧光信号,60℃反应,每 30 sec采集一次荧光信号。

 

 

实验结果

 

 

注意事项

1. 利用本产品的反式剪切活性进行分子诊断实验,可参考本公司的 HOLMESv2[1]体系。

2. 为防止 RNase 污染,请保持实验区干净整洁,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

3. 本产品仅包含 Cas 酶,CRISPR 反应体系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制备,10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推荐从 TOLOBIO 选购。

4. 复溶后的 AapCas12b 需在冰上配制反应体系,且使用后立即将酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一个月)。

5. 本产品仅供科研使用。

 

 

参考文献

[1] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.

 

 

特别说明

购买本产品并不代表获得吐露港的专利许可或其他知识产权许可!吐露港在大中华区拥有 Cas12 核酸检测的底层专利(中国发明专利,专利号:ZL201710573752.0;ZL201810560284.8),并通过与美国 SherlockBiosciences, Inc.交叉授权获得大中华区 Cas13 核酸检测底层技术的独占许可。如购买本产品用于商业或非科研目的,请联系 bd@tolobio.com 获得许可。

 

常见问题解答

产品说明书

#V32118 AapCas12b (Lyo)

pdf

815.0KB

参考文献

COA查询

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