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V32101E SpCas9 Nuclease(冻干粉)

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V32101E SpCas9 Nuclease(冻干粉)

  • 规 格:
    • 100 µg
    • 10×100 µg

货 号:

#V32101E


价 格:

¥ 0

¥ 6650


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产品概述

产品描述

SpCas9 是一种由 crRNA 和 tracrRNA(或单独的 sgRNA)引导的 DNA 内切酶,来源于 S. pyogenes 菌株。SpCas9 以 PAM(NGG)依赖的方式特异性识别并切割 dsDNA 靶标。Cas9 在靶序列中的切割位点距离 PAM 位点 3 bps。此外,SpCas9 还能在 DNA PAMmer 序列存在的情况下特异性地裂解 ssDNA 或 ssRNA(详情请参阅 PMID: 24476820; PMID: 25274302)。SpCas9 还可用于体外实验,用于裂解目标 DNA 和克隆目标片段(详情请参考 PMID: 26323354)。

本产品为不含甘油的冻干型 SpCas9 核酸酶,可在室温下运输和储存。用冻干复溶液溶解后,其性能与非冻干型 SpCas12b 核酸酶(#32101,ToloBio)相当。该产品可以粉末和球状等多种冻干形式提供,以满足不同下游应用的需要。

 

 

产品组分

组分

V32108E-SP V32108E-01 V32108E-02
● SpCas9 冻干粉(螺帽管)

10 μg

100 μg

100 μg × 5
 冻干酶复溶液

200 μL

200 μL

1 mL
 10 × HOLMES Buffer for Cas9

1 mL

1 mL 1 mL × 5

◆ 建议使用 124 μL 复溶液复溶一管 100 μg 的 SpCas9 冻干粉,复溶后酶浓度为 5 μM,即 5 pmol/μL。

 

 

保存条件

本产品常温保存及运输;复溶后于-20℃保存,避免反复冻融。

 

 

实验流程

1.冰上制备如下CRISPR顺式剪切反应体系:

组分

体积 

终浓度 

10 × HOLMES Buffer for Cas9(#32041)

2 μL 1 ×

5 μM SpCas9 Nuclease

1 μL 250 nM

10 μM sgRNA

0.5 μL 250 nM

1 μM Target dsDNA

0.5 μL 25 nM

Nuclease-free water

Up to 20 μL  

2.将反应混合物在 37℃下反应 30 min,然后 85℃下,5 min,灭活。用核酸电泳分析产物。

 

 

实验结果

 

 

注意事项

1. 为防止 RNase 污染,请保持实验区干净整洁,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. 本产品仅包含 Cas 酶,CRISPR 反应体系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制备,10 × HOLMES Buffer for Cas9 (#32041)推荐从 TOLOBIO 选购。

3. 复溶后的 SpCas9 需在冰上配制反应体系,且使用后立即将酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一个月)。

4. 本产品仅供科研使用。

常见问题解答

产品说明书

#V32101 SpCas9(冻干型)

pdf

398.4KB

参考文献

COA查询

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