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CC96172 T7 Express LysY/Iq
产品概述
产品描述
T7 Express LysY/Iq是BL21菌株的衍生菌株，广泛用于蛋白的原核表达实验。T7 Express lysY/Iq菌株中的T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域(基因组中无λ前噬菌体序列)可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Lon 和OmpT蛋白酶缺陷可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY/Iq菌株对噬菌体T1的抗性。LysY质粒(携带氯霉素抗性)是T7溶菌酶的一个变体，缺乏任何酰胺酶活性，因此细胞在诱导过程中对裂解不太敏感。而且T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，同时不干扰IPTG诱导的表达。不限制甲基化DNA(McrA-、McrBC-、EcoBr-m-、Mrr-)。LysY溶菌酶/lacIq质粒的维持不需要抗生素选择。总的来说，lacIq对表达的严格控制允许克隆潜在毒性基因，T7溶菌酶控制T7 RNA聚合酶可以表达毒性基因。经pUC19质粒转化检测，T7 Express LysY/Iq感受态细胞的转化效率可达108 cfu/μg DNA。
产品优势
✽ 高转化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 可用于克隆潜在毒性基因或表达毒性基因
产品组分
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组分 |
CC96172-01 |
CC96172-02 |
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T7 Express LysY/Iq化学感受态 |
10 × 100 μL |
100 × 100 μL |
基因型：MiniF lysY lacIq (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS )2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS ) endA1 Δ(mcrC-mrr) 114::IS*10
产品应用
T7 Express LysY/Iq感受态细胞可用于克隆潜在毒性基因或表达毒性基因。
实验流程
1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。
✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。
✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。
5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。
6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。
保存条件
-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。
相关参数
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感受态类型 |
化学感受态 |
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感受态菌株名称 |
T7 Express LysY/Iq |
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种属 |
大肠杆菌 |
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转化效率 |
高效率 (>1x10^8 cfu/µg pUC19 DNA) |
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菌株用途 |
表达 |
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应用特征 |
适用于克隆潜在毒性基因或表达毒性基因 |
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是否可进行蓝白斑筛选 |
否 |
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菌株抗性 |
氯霉素；四环素 |
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培养基 |
LB |
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培养条件 |
37℃，有氧 |
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诱导方法 |
- |
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保存条件 |
-80℃ |
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运输条件 |
干冰 |
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包装规格 |
管装 (100 µL/管) |
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出品公司 |
ToloBio |
常见问题解答
参考文献
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