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CC96164 BL21(DE3)/pLysS
产品概述
产品描述
BL21(DE3)/pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，可以表达能抑制T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme)，从而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG诱导前的本底表达，即导致本底性的外源重组蛋白的表达被有效抑制，但不干扰IPTG诱导的表达。这种情况下特别适合于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。此外，T7溶菌酶还可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖导致大肠杆菌溶解。该菌株染色体整合了λ(DE3)序列，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导该菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21(DE3) pLysS菌株适合T7启动子驱动的重组蛋白诱导表达系统，比如常见的原核表达载体pET系列。该感受态细胞经pUC19质粒检测，其转化效率高达108 cfu/μg DNA。
产品优势
✽ 高转化效率：>1x108 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 专门构建用于高水平重组蛋白表达
✽ 能降低外源重组蛋白的本底表达
产品组分
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组分 |
CC96164-01 |
CC96164-02 |
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BL21(DE3)/pLysS化学感受态 |
10 × 100 μL |
100 × 100 μL |
基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CamR)
产品应用
BL21(DE3)/pLysS感受态细胞适用于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。
实验流程
1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。
✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。
✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。
5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。
6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。
保存条件
-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。
相关参数
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感受态类型 |
化学感受态 |
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感受态菌株名称 |
BL21(DE3)/pLysS |
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种属 |
大肠杆菌 |
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转化效率 |
高效率 (>1x10^8 cfu/µg pUC19 DNA) |
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菌株用途 |
表达 |
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应用特征 |
适用于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达 |
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是否可进行蓝白斑筛选 |
否 |
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菌株抗性 |
氯霉素 |
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培养基 |
LB |
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培养条件 |
37℃，有氧 |
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诱导方法 |
- |
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保存条件 |
-80℃ |
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运输条件 |
干冰 |
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包装规格 |
管装 (100 µL/管) |
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出品公司 |
ToloBio |
常见问题解答
参考文献
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