■ 产品简介

本试剂盒适用于从TAE或TBE电泳缓冲液配制的琼脂糖凝胶、PCR反应产物或其他酶促反应物中提取纯化高质量的DNA，回收效率可达80%。该试剂盒采用特殊的吸附膜，能够有选择地吸附核酸分子，去除反应液中的各种蛋白、引物、dNTP等，得到高质量的DNA纯化产物，可直接用于酶切、测序等后续的分子生物学试验。本试剂盒具有以下特点：

1. 适用于高效回收≤10 kb的DNA片段；

2. 单柱可吸附20 μg DNA；

3. 操作简单快速，整个回收过程仅需 15 min。

■ 产品组分

■ 保存方法及注意事项

本试剂盒在常温 (10-30°C)干燥保存，有效期见包装。

Wash Solution (concentrate)使用前需按瓶身标签说明加入相应体积的无水乙醇，混匀后使用，并在瓶身做好已加入无水乙醇标记，于室温密闭保存！

Binding Buffer中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

本产品仅供科研使用。

■ 快速操作流程

1. 准备工作

a. 检查Wash Solution (concentrate) 中是否已加入无水乙醇。

b. 80%乙醇配制：用ddH2O或DEPC水配制，现配现用。

c. Binding Buffer在低温下可能产生沉淀, 使用前请检查。如有沉淀, 请于37°C溶解沉淀，冷却至室温后使用。

d. 如做胶回收实验，请将水浴锅调至60°C。

2. A. (胶回收) :用干净的刀片等切胶工具，在紫外灯下从琼脂糖凝胶中切取目标片段。将切下的胶块放入干净的1.5 mL离心管中，称重，每管胶块建议控制在100-200 mg，最多不超过400 mg;根据琼脂糖凝胶浓度不同，每100 mg胶块加入300-500 μL Binding Buffer，60°C水浴5-10 min溶胶。

· 每100 mg的≤1%琼脂糖凝胶加入300 μL Binding Buffer；每100 mg的1%~1.5%琼脂糖凝胶加入400 μL Binding Buffer；每100 mg的>1.5%琼脂糖凝胶加入500 μL Binding Buffer。

· 切胶过程需尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。

· 切胶过程需尽可能快，减少DNA在紫外线中的暴露时间。  

· 溶胶过程中每隔1 min手动颠倒混匀一次，观察到胶块完全融化即可，处理时间过长将导致DNA损伤。

B. (PCR产物直接回收) :将PCR产物转移到一个干净的1.5 mL离心管中，加入5倍体积的Binding Buffer (例如，50μL的PCR产物，加入250 μL Binding Buffer) ，混匀；当待回收的DNA片段小于100 bp时，还需额外加入与PCR产物等体积的异丙醇，混匀。

3. 将吸附柱放入收集管中，转移溶液至吸附柱中，12,000 × g离心30 sec。倒掉收集管中液体，再将吸附柱放入同一个收集管中。

· 如果溶液总体积大于750 μL，则每次上柱750 μL，多次上柱。

4. 加入 600 μL Wash Solution，12,000 × g离心30 sec，倒掉收集管中液体，再将吸附柱放入同一个收集管中。

5.加入 600 μL 80%乙醇水溶液，12,000 × g离心3 min，将吸附柱转移到一个新的1.5 mL离心管中，丢弃装有废液的收集管。

· 取出吸附柱时需注意吸附柱底部不能碰到收集管中废液，如果不小心碰到，需要倒掉收集管中废液，将吸附柱再次放回收集管中，空柱12,000 × g离心1 min再小心取出吸附柱，转移到新的1.5 mL离心管

6. 向吸附膜中央加入20-50 μL Elution Buffer, 室温静置2 min后，12,000 × g离心1 min。

保存管中 DNA 溶液。

· Elution Buffer可以用TE或无酶水代替。

· Elution Buffer、TE或无酶水洗脱前预热至60°C，可进一步提高得率