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36101 ToloPrep Plasmid DNA Mini Preparation Kit
产品概述
产品描述
ToloPrep Plasmid DNA Mini Preparation Kit柱式质粒 DNA 小量抽提试剂盒采用了一种新型的吸附材料，该吸附柱拥有良好的流速、超强的DNA 结合能力和优秀的洗脱效率。改良的配方使试剂盒的菌液裂解能力、DNA 与吸附柱的结合能力大大加强，对于高拷贝质粒，从1-5 mL 过夜菌液(OD600 = 2.0)中可以获得约20 µg 的质粒 DNA。操作过程快速、方便，无需使用酚 / 氯仿抽提，无需乙醇沉淀，整个抽提过程可以在 20 min内完成，由本试剂盒抽提得到的质粒纯度高，OD260/OD280 比值一般为 1.8-2.0 之间，可直接用于转化、DNA 测序、PCR、基于 PCR 的突变、体外转录等。
产品组分
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组分 |
#25205-01（100 rxns） |
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○ 纯化套餐（吸附柱+收集管） |
200 套 |
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○ Buffer P1 |
60 mL |
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○ Buffer P2 |
60 mL |
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○ Buffer N3 |
80 mL |
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○ Buffer PB |
35 mL |
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○ Buffer PW（concentrate） |
25 mL |
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○ Buffer EB |
30 mL |
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○ RNaseA（10 mg/mL） |
600 μL |
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操作手册 |
一份 |
保存方法及注意事项
本试剂盒于常温运输，未开启的试剂盒可于室温(15-25°C)保存，有效期见包装。加入RNaseA后，Buffer P1请存放于 2-8℃，有效期为半年，其它组分可室温放置一年，长期存放请置于 2-8℃。
第一次使用前，将RNaseA溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，做好标记，置于2-8℃保存。使用前需在室温放置一段时间，恢复到室温使用。
第一次使用前，请按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇，并做好标记。
使用前如发现Buffer P2、Buffer N3和Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。请勿剧烈晃动Buffer P2。使用后应立即盖紧盖子。
Buffer P2、Buffer N3和Buffer PB中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
本产品仅供科研使用。
常见问题解答
Q1: 未提出质粒或质粒得率较低？
A1: 大肠杆菌老化。请涂布平板培养后，重新挑单菌落进行液体培养。
A2: 质粒拷贝数低。由于使用低拷贝数载体引起的质粒 DNA 提取量低，可以使用更多的菌量但需要相应的增加溶液使用量。
A3: 菌体中无质粒。有些质粒本身不能在某些菌体中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此不要频繁转接， 每次接种时应接种单菌落。另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。
A4: 碱裂解不充分。使用过多的菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加Buffer P1、Buffer P2和Buffer N3的用量。
A5: 溶液使用不当。当Buffer P2、Buffer N3和Buffer PB在温度较低时可能会出现浑浊，应置于 37℃温浴直至溶解，待冷却至室温后使用。
A6: 吸附柱过载。不同产品中吸附柱的吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大, 请分多次提取。若用富集培养基（SOC 或 SOB）或宿主菌生长率较高，则须减少菌液使用量。
A7: 质粒洗脱不完全。质粒洗脱时，可适当加温（37-60℃）或延长溶解时间，对大质粒效果更为明显。
参考文献
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