32137 enLwaCas13a Nuclease
产品概述
■ 产品描述
enLwaCas13a（enhanced LwaCas13a）是一种基于野生型LwaCas13a升级改造后获得的高活力突变体。与野生型LwaCas13a的作用机制一样，enLwaCas13a可在crRNA引导下特异性识别并剪切靶标RNA。此外，当enLwaCas13a蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，能启动针对非特异序列单链RNA的剪切，将体系中的任意序列单链RNA切碎。
■ 产品组分
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组分 |
32137-01 (100 pmol) |
32137-03 (1,000 pmol) |
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100 pmol |
1,000 pmol |
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1 mL |
1 mL |
enLwaCas13a Nuclease (10 μM) a
10 × HOLMES Buffer for Cas13aa. enLwaCas13a Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL；100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL；
■ 保存条件
-20℃储存。
■ 活性定义
在总体积为20 μL的1 × HOLMES Buffer for Cas13a [pH 7.6]反应体系中，37℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量定义为1 transU。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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10 × HOLMES Buffer for Cas13a |
2 μL |
1 × |
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10 µM enLwaCas13a Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM crRNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM Target RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM ssRNA Reporter (FAM-BHQ1) |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
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● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，enLwaCas13a Nuclease可用1×HOLMES Buffer for Cas13a稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas13酶长期保存，请使用Cas13 Dilution Buffer，#32013），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target RNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
常见问题解答
参考文献
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