32136 sssLbCas12a Nuclease
产品概述
■ 产品简介
sssLbCas12a（single-stranded DNA-specific LbCas12a）是一种基于野生型LbCas12a核酸内切酶升级改造获得的突变体。该突变体经过定向改造与筛选，可以特异识别靶标ssDNA，而对靶标dsDNA的识别和剪切活力极弱。与野生型LbCas12a的作用机制类似，sssLbCas12a也通过crRNA介导，靶向识别并剪切靶标ssDNA，且该识别和剪切不依赖于PAM位点。此外，对靶标ssDNA的识别和结合能激活sssLbCas12a的反式剪切活性，将体系中的ssDNA探针切碎。因此，sssLbCas12a酶可用于靶标核酸的快速检测。详见本公司开发的HOLMES[1]核酸快检技术。
■ 产品组分
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组分 |
32136-01 (100 pmol) |
32136-03 (1,000 pmol) |
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100 pmol |
1,000 pmol |
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1 mL |
1 mL |
sssLbCas12a Nuclease (10 μM) a
10×HOLMES Buffer for Cas12aa. sssLbCas12a Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL；100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL；
■ 保存条件
-20℃储存。
■ 活性定义
在总体积为20 μL的1 × HOLMES Buffer for Cas12a [pH 8.5]反应体系中，37℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12a酶量定义为1 transU[2]。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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10×HOLMES Buffer for Cas12a |
2 μL |
1 × |
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10 μM sssLbCas12a Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM crRNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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1 μM Target DNA c |
0.5~5 μL |
25~250 nM |
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10 μM ssDNA Reporter |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
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b. 体系中Target DNA为ssDNA。
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，sssLbCas12a Nuclease可用1×HOLMES Buffer for Cas12a稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas12酶长期保存，请使用Cas12 Dilution Buffer，#32012），crRNA、Target DNA及ssDNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target DNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
常见问题解答
参考文献
COA查询
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