32134 LbuCas13a (C2c2) Nuclease
产品概述
■ 产品简介
LbuCas13a(又名C2c2)核酸酶是依赖于crRNA介导的RNA内切核酸酶，来源于Leptotrichia buccalis菌株。在靶标单链RNA存在PFS序列的情况下，可特异地识别并剪切靶标RNA。此外，当LbuCas13a蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，能启动针对非特异序列单链RNA的剪切，将体系中的任意序列单链RNA切碎。
■ 产品组成
| 组分 | 32134-01 (100 pmol) | 32134-03 (1,000 pmol) |
 LbuCas13a Nuclease (10 μM) a |
100 pmol | 1,000 pmol |
 10 × HOLMES Buffer for Cas13a |
1 mL | 1 mL |
a. LbuCas13a Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL；
■ 保存条件
-20℃储存。
■ 活性定义
在总体积为20 μL的1 × HOLMES Buffer for Cas13a [pH 7.6]反应体系中，37℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量定义为1 transU。
■ 实验流程
1.推荐反应体系
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas13a | 2 μL | 1 × |
| 10 µM LbuCas13a Nuclease | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM crRNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM Target RNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM ssRNA Reporter | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，LbuCas13a Nuclease可用1×HOLMES Buffer for Cas13a稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas13酶长期保存，请使用Cas13 Dilution Buffer，#32013），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target RNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
常见问题解答
Q1: 如何设计LbuCas13a的sgRNA？
A1: LbuCas13a的crRNA可参照以下序列设计：5’–GACCACCCCAAAAAUGAAGGGGACUAAAACNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN–3’ ,（黑色代表direct repeat区，蓝色下划线表示crRNA与特异靶标序列互补配对的spacer区，建议spacer区长度为22-28 nt)。
参考文献
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