32124 GeCas12a2 Nuclease
产品概述
■ 产品简介
GeCas12a2核酸酶是从环境宏基因组中筛选获得，不是来自单一分离纯化的已知纯培养菌株。其氨基酸序列和SuCas12a2一致性达 89%。Cas12a2是由crRNA介导的靶向RNA序列的核酸内切酶，其crRNA的直接重复序列(Direct Repeat，DR)与Cas12a基本一致。在crRNA的引导下，GeCas12a2 酶与crRNA、靶标ssRNA结合形成三元复合物，并可特异地剪切靶标ssRNA。同时，GeCas12a2还会被激发出针对非配对的ssDNA、ssRNA和dsDNA的反式剪切，将体系中的任意序列ssDNA、ssRNA和dsDNA切碎。相比于其他Cas核酸酶在被靶标激活后仅反式切割ssDNA(如Cas12a、Cas12b)或ssRNA(如Cas13a)，GeCas12a2具有更加强的非特异剪切活性。
■ 产品组成
| 组分 | 32124-01 (100 pmol) | 32124-03 (1,000 pmol) |
 GeCas12a2 Nuclease (10 μM) a |
100 pmol | 1,000 pmol |
 10 × HOLMES Buffer for Cas12a |
1 mL | 1 mL |
a. GeCas12a2 Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL。
■ 保存条件
-20℃储存。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系(以剪切非特异序列ssRNA为例)
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12a | 2 μL | 1 × |
| 10 μM GeCas12a2 Nuclease | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 μM crRNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 1 μM Target RNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
| 10 μM ssRNA Reporter | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，GeCas12a2 Nuclease可用1 × HOLMES Buffer for Cas12a稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas12酶长期保存，请使用Cas12 Dilution Buffer，#32012），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target RNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
常见问题解答
参考文献
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