32122 SuCas12a2 Nuclease
产品概述
■ 产品简介
SuCas12a2核酸酶来源于Sulfuricurvum sp. PC08-66菌株。Cas12a2是由crRNA介导的RNA内切核酸酶，其crRNA的直接重复序列(Direct Repeat，DR)与Cas12a基本一致，Cas12a2在靶标单链RNA存在PFS序列的情况下，可特异地识别并剪切靶标单链RNA。此外，相比于其他Cas核酸酶在被特异靶标激活后仅非特异性地降解ssDNA(例如Cas12a、Cas12b)，或ssRNA(例如Cas13a)，或ssRNA和ssDNA(例如Cas12g)，Cas12a2具有更加强大的非特异剪切活性，即当Cas12a2酶与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，能启动针对非特异序列ssDNA、ssRNA和dsDNA的剪切，将体系中的任意序列ssDNA、ssRNA和dsDNA切碎。
■ 产品组成
| 组分 | 32122-01 (100 pmol) | 32122-03 (1,000 pmol) |
 SuCas12a2 Nuclease (10 μM) a |
100 pmol | 1,000 pmol |
 10 × HOLMES Buffer for Cas12a |
1 mL | 1 mL |
a. SuCas12a2 Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL。
■ 保存条件
-20℃储存。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系(以剪切非特异序列ssRNA为例)
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12a | 2 μL | 1 × |
| 10 μM SuCas12a2 Nuclease | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 μM crRNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 1 μM Target RNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
| 10 μM ssRNA Reporter | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，SuCas12a2 Nuclease可用1 × HOLMES Buffer for Cas12a稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas12酶长期保存，请使用Cas12 Dilution Buffer，#32012），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target RNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
■ 实验结果
剪切ssRNA Reporter
剪切ssDNA Reporter
剪切dsDNA
常见问题解答
Q1：CRISPR荧光检测实验操作注意事项有哪些？
A1：在靶标浓度较高的情况下，Cas蛋白的反式剪切速度会非常快，可在数分钟（甚至数十秒）内到达平台荧光值。因此，建议提前打开仪器并设好反应程序（在程序设置阶段需要注意CRISPR反应与qPCR不同，需要关闭荧光校正或基线扣除等选项）。CRISPR反应体系建议在冰上配置反应体系，并将靶标加在管盖上，盖上盖子并确保程序无误后短暂离心，使不同孔之间同时开始反应，并迅速放入仪器中开始记录荧光。同时，注意设置不加靶标的阴性对照，避免无法识别出已经到达平台的荧光信号。
Q2：CRISPR荧光检测实验结果如何判读？
A2：CRISPR荧光检测体系的阴性对照一般是无靶标对照，即反应体系中除了Target以外的其他组分都加。在荧光信号数据分析时，建议关注3个重要指标：1）信噪比S/N，即阳性对照体系与阴性对照体系在相同反应时间点的荧光值比值，高S/N值说明检测体系能清晰区分目标与非目标反应，灵敏度与可靠性更高；2）荧光增量（Δ荧光值），即同一反应孔的终点荧光值减去起始荧光值的差；3）荧光信号上升阶段的斜率，斜率越大代表反应体系的效率越高，即探针被剪切的速度越快。此外，不同qPCR仪器之间荧光度值差异非常，需尽量在同一机器上进行数据对比。
Q3：CRISPR信号读取方式有哪些？
A3：常见的CRISPR信号读取方式包括荧光、试纸条、电化学、拉曼光谱、比色法等；
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CRISPR-Dx信号读取 |
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荧光 |
试纸条 |
电化学 |
参考文献
COA查询
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