32022 TOLO Cas12b QC target dsDNA and sgRNA
产品概述
■ 产品简介
本试剂盒中包含Cas12b的Target dsDNA和对应的sgRNA，可用于本公司提供的Cas12b酶顺式剪切和反式剪切体系的质控。Target dsDNA片段长度为2.2 kb，Cas12b酶可在产品中sgRNA的引导下特异识别并剪切该Target，使其双链断裂，得到两段片段长度分别为1.3 kb和0.9 kb的剪切产物。此外，Cas12b酶一旦在sgRNA的引导下特异识别并结合Target DNA后，便能启动针对非特异序列单链DNA的剪切，将体系中的任意序列ssDNA切碎。本产品中的ssDNA Reporter是单链DNA寡核苷酸探针，5′端标记FAM（报告基团），3′端标记BHQ1（淬灭基团）。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，探针一旦被Cas12b酶剪切，报告基团和淬灭基团分离，即可释放出荧光信号。
■ 产品组分
| 组分 | 32022-01 (10 T) |
 TOLO Cas12b QC target dsDNA and sgRNA a |
5 μL |
 HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM) b |
5 μL |
a. 应保存于-80℃并避免反复冻融，6个月内使用，组分中Target DNA和 sgRNA的浓度分别为1 μM和10 μM。
b. ssDNA reporter 为液体，浓度10 μM，应于-20℃避光保存，12个月内使用。
■ 保存条件
-80℃储存。
■ 实验流程
1. 顺式剪切反应体系
| 组分 | 体积 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12b | 2 μL |
| 10 μM AapCas12b Nuclease (ToloBio, #32118) | 0.5 μL |
| TOLO Cas12b QC target dsDNA and sgRNA | 0.5 μL |
| Nuclease-free Water | Up to 20 μL |
● 按照上表体系，最终Cas酶 : sgRNA : target DNA的摩尔比为10:10:1；20 μL体系中Target DNA总量约680 ng。
60℃反应30 min~1 h，85℃灭活5 min，核酸电泳分析顺式剪切产物
2. 反式剪切反应体系
| 组分 | 体积 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12b | 2 μL |
| 10 μM AapCas12b Nuclease (ToloBioa, #32118) | 0.5 μL |
| TOLO Cas12b QC target dsDNA and sgRNA | 0.5 μL |
| 10 μM HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM) (ToloBio，#31105) | 0.5 μL |
| Nuclease-free Water | Up to 20 μL |
● 体系中AapCas12b酶的用量可以在0.05~0.5 μL范围内进行调整。
实时荧光定量PCR仪记录FAM通道荧光信号，60℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
常见问题解答
参考文献
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