31205 HOLMES-LFA ssRNA reporter 2 (DIG/Biotin)
产品概述
■ 产品描述
HOLMES-LFA ssRNA reporter 2（DIG/Biotin）是单链RNA寡核苷酸探针，其5′端标记DIG，3′端标记Biotin。本探针经过特别的序列优化，对Cas13剪切高度敏感，同时，该探针几乎不响应Cas12蛋白剪切。因此，本探针可搭配CRISPR Dual-System Nucleic Acid Test Strips（货号#31204）和HOLMES-LFA ssDNA reporter 1（FAM/Biotin，货号#31201）使用。当ssRNA探针完整时，会被C线（SA）捕获，当ssRNA探针被Cas13酶切断时，带有DIG标记的片段则可不被C线截留，从而流动到T1线显色。同理，当ssDNA探针完整时，会被C线（SA）捕获，当ssDNA探针被Cas12酶切断时，带有FAM标记的片段则可不被C线截留，从而流动到T2线显色。通过试纸条显色结果可以判断对应的Cas酶是否被激活。
■ 产品组成
| 组分 | 31205-01 |
 HOLMES-LFA ssRNA reporter 2 (DIG/Biotin) a |
1 OD |
a. HOLMES-LFA ssRNA reporter 2（DIG/Biotin）总量为1 OD (约为12.82 nmol)，为干粉状态。使用前请先短暂离心，然后加入128.2 μL Nuclease-Free water溶解，得到浓度为100 μM的贮存液，在无反复冻融的条件下可于-80℃避光保存6～12个月。使用前再将贮存液用Nuclease-Free water稀释成10 μM的工作液，按下表推荐的浓度加入CRISPR剪切反应体系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6个月内使用。
■ 保存条件
-20℃避光储存；≦4℃运输。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系，以LbCas12a/LbuCas13a为例
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas13 (#32045) | 2 μL | 1 × |
| 10 μM LbuCas13a Nuclease (#32134) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM crRNA 1 | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Target RNA | x μL | 25~250 nM |
| 10 μM HOLMES-LFA ssRNA reporter 2 (DIG/Biotin, #31205) | 0.1~1 μL | 50~500 nM |
| 10 μM LbCas12a Nuclease (#32108) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 μM crRNA 2 | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Target DNA | x μL | 25~250 nM |
| 10 μM HOLMES-LFA ssDNA reporter 1 (FAM/Biotin, #31201) | 0.1~1 μL | 50~500 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
● 如按照上表配制20 μL总反应体积，插入试纸条前需要补充30 μL Nuclease-free water至总体积为50 μL；也可等比例放大上述体系至总体积为50 μL，50 μL体系反应结束后可直接插入试纸条。
● 请注意探针投入量需要根据所搭配试纸条的载量进行调整；推荐搭配CRISPR Dual-System Nucleic Acid Test Strips（货号#31204）。
反应温度和反应时间可根据不同Cas酶的活性和反应最适温度进行设定。
常见问题解答
参考文献
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