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31121 HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)

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31121 HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)

  • 规 格:
    • 1 OD powder

货 号:

31121


价 格:

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产品概述

■ 产品描述

HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1(Cy5)是单链DNA寡核苷酸探针,5′端标记Cy5荧光基团 (Fluorescence),3′端标记淬灭基团 (Quencher)。当HOLMES-Fluo ssDNA reporter 探针完整时,荧光基团发射的荧光信号会被淬灭基团淬灭。而当HOLMES-Fluo ssDNA reporter 探针被切断后,5'端的Cy5荧光基团和淬灭基团分离,从而发出荧光信号。

HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1(Cy5)探针经过特别的序列优化,对Cas12a、Cas12b和Cas12f剪切高度敏感;同时该探针不响应Cas13蛋白的剪切,因此,可与FAM基团标记的ssRNA荧光探针联合,用于Cas12/Cas13双系统反应体系。

 

■ 产品组分

组分 31121-01
 HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5) a 1 OD

a. HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)总量为1 OD (约为13.44 nmol),为干粉状态。使用前请先短暂离心,然后加入134.4 μL DNase/RNase-Free Water溶解,得到浓度为100 μM的贮存液,在无反复冻融的条件下可于-80℃避光保存6~12个月。使用前再将贮存液用DNase/RNase-Free Water稀释成10 μM的工作液,按下表推荐的浓度加入CRISPR剪切反应体系中。剩余工作液可于-20℃避光保存,3~6个月内使用。

 

■ 保存条件

-20℃避光储存;≦4℃运输。

 

■ 实验流程

1. 推荐反应体系(以LbuCas13a为例)

组分 体积 终浓度
10 × HOLMES Buffer for Cas12a (#32042)  2 μL 1 ×
10 μM LbCas12a Nuclease (#32108) 0.05~0.5 μL 25~250 nM
10 µM guide RNA 0.05~0.5 μL 25~250 nM
1 µM Target RNA 0.5~5 μL 25~250 nM
10 μM HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)  0.05~0.5 μL 25~250 nM
Nuclease-free water Up to 20 μL  

● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整,用量较少时可先将各组分稀释后加入体系;

通过实时荧光定量PCR仪记录荧光信号,每30 sec采集一次荧光信号。

HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)适用于Cas12a、Cas12b、Cas12f(即Cas14)等能以ssDNA为剪切底物的CRISPR体系;反应温度需根据不同Cas酶的最适温度进行设定。

常见问题解答

Q1:#31101和#31121探针有什么区别?

A1:#31101和#31121探针仅荧光基团修饰不同,探针序列及在不同Cas体系中的剪切效率一致。

 

Q2:不同Cas酶单系统的荧光探针推荐选择哪一种?

系列

单系统CRISPR荧光体系

推荐搭配荧光探针

Cas12系列:

Cas12a, Cas12b, Cas12f (Cas14a)

LbCas12a Nuclease

货号: #32108

HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (FAM)

货号: #31101

Lb5Cas12a Nuclease

货号: #32110

FnCas12a Nuclease

货号: #32106

AapCas12b Nuclease

货号: #32118

AacCas12b Nuclease

货号: #32116

Un1Cas12f1 (Cas14a) Nuclease

货号: #32119

Cas13系列

LwaCas13a Nuclease

货号: #32117

HOLMES-Fluo ssRNA reporter 1 (FAM)

货号: #31111

LbuCas13a Nuclease

货号: #32134

 

Q3:Cas12/Cas13双系统检测推荐如何搭配酶和荧光探针?

双系统CRISPR荧光体系

推荐搭配荧光探针

Cas13若选: LwaCas13a Nuclease

货号: #32117

Lb5Cas12a/FnCas12a/LbCas12a/AsCas12a Nuclease, 4选1

货号: #32110/#32106/#32108/#32104

HOLMES-Fluo ssRNA reporter 4 (FAM)

货号: #31114

HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)

货号: #31121

Cas13若选: LbuCas13a Nuclease

货号: #32134

Lb5Cas12a/FnCas12a/LbCas12a/AsCas12a Nuclease, 4选1

货号: #32110/#32106/#32108/#32104

HOLMES-Fluo ssRNA reporter 5 (FAM)

货号: #31115

HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)

货号: #31121

Cas13若选: LbuCas13a Nuclease

货号: #32134

Lb5Cas12a/FnCas12a/LbCas12a Nuclease, 3选1

货号: #32110/#32106/#32108

HOLMES-Fluo ssRNA reporter 6 (FAM)

货号: #31116

HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5)

货号: #31121

备注:#31121-HOLMES-Fluo ssDNA repoter 1 (Cy5)序列与#31101序列一致,只是荧光标记基团不同。

 

Q4:不同Cas酶对荧光探针的反式剪切活力请参考下表:

备注:High Conc.含100 nM Cas蛋白,25 nM靶标核酸;Low Conc.含10 nM Cas蛋白,2.5 nM靶标核酸;+数量与剪切效率正相关;+/–表示剪切效率极低;–表示无剪切。

产品说明书

31121 HOLMES-Fluo ssDNA reporter 1 (Cy5) Manual

pdf

772.0KB

参考文献

COA查询

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