31117 HOLMES-Fluo ssRNA reporter 7 (FAM)
产品概述
■ 产品简介
HOLMES-Fluo ssRNA reporter 7 (FAM)是单链RNA寡核苷酸探针，5′端标记FAM荧光基团（Fluorescence），3′端标记荧光淬灭基团(Quencher)。当HOLMES ssRNA reporter探针完整时，荧光基团发射的荧光信号会被淬灭基团淬灭。而当HOLMES ssRNA reporter探针被切断后，5'端的FAM荧光基团和淬灭基团分离，从而发出荧光信号。HOLMES-Fluo ssRNA reporter 7 (FAM)探针经过特别的序列优化，对Cas13剪切高度敏感（如LtrCas13a），且对除Cas12a2之外的大部分Cas12蛋白的反式切割不敏感。
■ 产品组成
| 组分 | 31117-01 |
 HOLMES-Fluo ssRNA reporter 7 (FAM) a |
1 OD |
a. HOLMES-Fluo ssRNA reporter 7 (FAM)总量为1 OD (约为9.13 nmol)，为干粉状态。使用前请先短暂离心，然后加入91.3 µL DNase/RNase-Free Water溶解，得到浓度为100 µM的贮存液，在无反复冻融的条件下可于-80℃避光保存6～12个月。使用前再将贮存液用DNase/RNase-Free Water稀释成10 µM的工作液，按下表推荐的浓度加入CRISPR剪切反应体系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6个月内使用。
■ 保存条件
-20℃避光储存；≦4℃运输。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系（以LtrCas13a为例）
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas13 (#32045) | 2 μL | 1 × |
| 10 µM LtrCas13a Nuclease (#32133) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 μM crRNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 μM Target RNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM HOLMES-Fluo ssRNA reporter 7 (FAM) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
通过实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，每30 sec采集一次荧光信号。反应温度可根据不同的Cas13酶的最适温度进行设定。
常见问题解答
参考文献
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