31105 HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM)
产品概述
■ 产品描述
HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM)是单链DNA寡核苷酸探针，5′端标记FAM荧光基团 (Fluorescence)，3′端标记淬灭基团 (Quencher)。当HOLMES-Fluo ssDNA reporter 探针完整时，荧光基团发射的荧光信号会被淬灭基团淬灭。而当HOLMES-Fluo ssDNA reporter 探针被切断后，5'端的FAM荧光基团和淬灭基团分离，从而发出荧光信号。
HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM)探针经过特别的序列优化，对大部分Cas12a、Cas12b和Cas12f剪切较为敏感，尤其推荐用于YmeCas12a Nuclease（货号#32139）反应体系。
■ 产品组分
| 组分 | 31105-01 |
 HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM) a |
1 OD |
a. HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM)总量为1 OD (约为7.42 nmol)，为干粉状态。使用前请先短暂离心，然后加入74.2 μL Nuclease-free water溶解，得到浓度为100 μM的贮存液，在无反复冻融的条件下可于-80℃避光保存6～12个月。使用前再将贮存液用Nuclease-free water稀释成10 μM的工作液，按下表推荐的浓度加入CRISPR剪切反应体系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6个月内使用。
■ 保存条件
-20℃避光储存；≦4℃运输。
■ 实验流程
1. 推荐反应体系体系（以YmeCas12a为例）
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12a (#32042) | 2 μL | 1 × |
| 10 μM YmeCas12a Nuclease (#32139) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM guide RNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM Target DNA | 0.5~3 μL | 25~250 nM |
| 10 μM HOLMES-Fluo ssDNA reporter 5 (FAM) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
通过实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，每30 sec采集一次荧光信号；反应温度需根据不同Cas酶的最适温度进行设定。
常见问题解答
参考文献
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