31005 HOLMES® 5-mer ssDNA Reporter Library
产品概述
■ 产品描述
HOLMES® 5-mer ssDNA Reporter Library为高通量5碱基单链DNA报告探针文库，包含1024种独立5 nt单链DNA（ssDNA）探针，覆盖A/T/C/G四种碱基全部组合类型。所有探针5′端标记FAM荧光报告基团（Reporter），3′端标记荧光淬灭基团（Quencher）。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号会被淬灭基团淬灭。而当探针被切断后，5'端的FAM荧光报告基团和3′端的淬灭基团分离，从而发出可被检测的荧光信号。常见的Cas12酶在与guide RNA、target DNA组成三元复合物后，都会被激发出针对ssDNA的反式剪切活性（或称为旁路切割活性），将HOLMES® 5-mer ssDNA Reporter探针切碎，并发出荧光信号。
产品所有探针均经过高精度化学合成、高效纯化与严格质控，采用标准化 96 孔板分装体系，共分装 11 块板（编号Plate 01–Plate 11），适配各类高通量筛选平台。为便于检索与定位，1024 种探针按 5-mer 序列的字典序依次排布，各孔位与探针序列的对应关系详见文末附录「探针序列-孔位对照表」。
■ 产品组分
| 组分 | 31005-01 |
|
HOLMES® 5-mer ssDNA Reporter Library a |
50 pmol（each） |
a.探针已使用 1× TE 溶解，每种探针总量为 50 pmol（1 μM × 50 μL）。使用前请先短暂离心混匀。
■ 保存条件
-20℃避光储存；≦4℃运输。
■ 实验流程
1. 反式剪切反应体系（以LbCas12a为例）
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| 10 × HOLMES Buffer for Cas12a (#32042) | 2 μL | 1 × |
| 10 μM LbCas12a Nuclease (#32108) | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 10 µM guide RNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
| 1 µM Target DNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
| 1 µM HOLMES® 5-mer ssDNA (FAM) | 1 μL | 50 nM |
| Nuclease-free water | Up to 20 μL |
● 体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
通过实时荧光定量PCR仪记录荧光信号，每30 sec采集一次荧光信号。反应温度需根据不同Cas酶的最适温度进行设定。
常见问题解答
Q1：#31005探针文库对应的序列如何查询？
A1：在产品详情页下载产品说明书，即可获得1024种探针排列顺序和对应的序列。
Q2：#31005探针的修饰集团是什么？
A2：1024种探针序列不同，但都为FAM、BHQ1双端修饰。
参考文献
COA查询
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