25206 Tolo Basic RT-RMA Kit (Lyophilized Microbeads)
产品概述
■ 产品简介
Tolo Basic RT-RMA Kit (Lyophilized Microbeads)适用于RNA或DNA模板，是一种重组酶介导的恒温核酸快速扩增技术 (Recombinase-mediated amplification，RMA) 。此方法具有灵敏度高、稳定性好、反应时间短、反应条件简易等优点。可与CRISPR检测体系结合提高靶标检测的特异性，一步法推荐搭配LbCas12a (Tolobio #32108)，两步法推荐搭配LbCas12a或AapCas12b (Tolobio #32118)，也可采用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行终点法检测。
■ 产品组分
| 组分 | 25206 (96 T) |
 RT-RMA基础型冻干微球（铝箔袋） |
24 T × 4 |
 激活剂 |
250 μL |
■ 保存条件
2-8℃干燥、避光的条件下保存，有效期12个月。长时间储存建议放置在-20℃。冰袋运输。
■ 实验流程
1. 按下表进行反应体系预混液的制备，配制完成后请将上述体系充分混匀后离心。
| 组分 | 体积 |
| Primer F (10 μM) | 1 μL |
| Primer R (10 μM) | 1 μL |
| Template RNA | x μL |
| Nuclease-free Water | Up to 24 μL |
• 推荐反应体系中引物终浓度为0.4 μM。当反应性能较差时，可以在终浓度范围0.3~1.0 μM内调整引物浓度。
• 推荐模板体积为1-2 μL，建议不要超过总体积的20%；不同体系建议单独摸索模板添加体积。
2. 将24 μL预混液转移至每管冻干微球中，然后上下颠倒混匀直到扩增试剂重悬，最后短暂离心。
3. 在反应管盖内侧加入1 μL的激活剂，小心盖紧管盖，短暂离心，轻微涡旋震荡后，再次短暂离心。
4. 将反应管放置于提前预热好的恒温仪中（37～42℃）孵育20～30 min。（若样本中模板拷贝数低，可在反应4 min后取出反应管，短暂震荡离心后，再继续孵育。）
5. 孵育结束后，可85℃ 2 min终止反应。
6. 扩增产物可加入Loading Buffer（自备）进行琼脂糖凝胶电泳验证，但需要注意的是RMA为多酶反应体系，产物进行琼脂糖凝胶电泳前建议进行纯化或蛋白酶K处理，以免堵塞胶孔。
■ 注意事项
1. 引物长度建议为30~35 nt。引物过短会影响重组酶活性，引物过长容易形成二级结构影响扩增。
2. 扩增产物的气溶胶易造成假阳性，实验时也应设置不加模板的阴性对照，以确认待扩片段是否存在污染；进行琼脂糖凝胶电泳或其它后续分析时，应在分区空间或单独设备中进行开盖。
3. 在不同的核酸提取方法下，所提取的样本DNA含量和纯度会有差异，可能会导致扩增效率不一（影响因素包括PCR抑制剂：乙醇、苯酚、血红素等）。
4. RMA反应体系依赖激活剂来启动反应，因此，一旦加入激活剂后应立即上机。
5. 本产品仅作科研用途。
常见问题解答
Q1: 如何防止气溶胶污染？
A1: 核酸提取和扩增应严格分区；扩增反应全程应尽量避免开盖。
参考文献
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