25101 Tolo BstII DNA Polymerase
产品概述
■ 产品简介
Tolo BstII DNA Polymerase来源于Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶，经改造使其失去5'→3'核酸外切酶活性，但具有5'→3' DNA聚合酶活性和强链置换活性。Tolo BstII DNA Polymerase与野生型BstII DNA Polymerase相比，在扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性等方面均有大幅提高，同时提升了对dUTP的耐受性，非常适用于等温扩增反应，如LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) 等。
■ 产品组成
| 组分 | 25101-01 (800 U) |
 Tolo BstII DNA Polymerase (8 U/μL) |
100 μL |
 10 × Tolo BstII Buffer |
1 mL |
 MgSO4 (100 mM) |
150 μL |
■ 保存条件
-20℃避光储存；≦0℃运输。
■ 适用范围
1. 适用于LAMP、HDA、RCA等多种等温扩增反应。
2. Tolo BstII DNA Polymerase的理想反应温度为60-72℃，可在85℃处理5-10 min进行灭活，不能用于热循环测序或PCR反应。
■ 活性定义
1 U指65℃条件下反应30 min，能使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量。
■ 实验流程
以配制LAMP反应体系为例。
1. 反应体系
| 组分 | 体积 |
| 10 × Tolo BstII Buffer | 2.5 μL |
| dNTP Mix (10 mM each) | 3.5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1.5 μLa |
| FIP/BIP Primers (10 μM) | 4 μL |
| F3/B3 Primers (10 μM) | 0.5 μL |
| LF/LB Primers (10 μM) | 1 μL |
| Template DNA | X μL |
| Tolo BstII DNA Polymerase (8 U/μL) | 0.5 μL |
| ddH2O | Up to 25 μL |
a.上述体系Mg2+终浓度为8 mM (其中10× Tolo BstII Buffer中含有20 mM Mg2+)，推荐Mg2+终浓度6-10 mM。
2. 反应条件
65℃反应30-60 min，85℃，5 min失活。
■ 注意事项
1. 产品中Tolo BstII DNA Polymerase使用时需要先离心，避免酶量损失。
2. 各组分使用前要充分解冻混匀。
3. 本产品仅作科研用途。
■ 常见问题及解决方案
1. 防止气溶胶污染：核酸提取和扩增严格分区；非必要反应全程禁止开启反应盖。
2. 扩增效率不高的因素：逐一排除体系污染、非特异性扩增、引物质量、引物比例（通常FIP/BIP∶F3/B3∶LF/LB为8∶1∶2，具体可调整）等情况。
常见问题解答
参考文献
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