3
ph
%{tishi_zhanwei}%

24604 One Step Yeast Direct PCR Kit

  • 24604.png

24604 One Step Yeast Direct PCR Kit

  • 规 格:
    • 100 rxns

货 号:

24604


价 格:

¥ 0

¥ 1000


联系经销商

*具体价格咨询当地经销商

隐藏域元素占位

产品概述

产品描述

本试剂盒可直接快速地对酵母菌落进行 PCR扩增,酵母菌落经裂解液简单处理后即可作为PCR模板使用。无需进行基因组提取等步骤,极大地缩短了实验耗时,操作简单快速。试剂盒中配有2 × Yeast Direct PCR Mix (with Dye),包含特殊修饰的热启动DNA Polymerase、dNTP以及优化的缓冲体系。PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增。体系中预混有电泳缓冲液和染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便快捷。经反复测试广泛适用于10 kb以内目标片段扩增。

 

 

产品组分

组分

24604 (100 rxns) 

○ 1 × Yeast Lysis Buffer

20 mL

2 × Yeast Direct PCR Mix (with Dye) a

2 × 1.25 mL

a.组分中已包含 dNTP、Mg2+、DNA Polymerase、Dye等。

 

 

保存条件

2×Yeast Direct PCR Mix (with Dye) 需-20℃避光保存;其余组分2~8℃保存;≤ 0℃运输。

 

 

产品优势

快速便捷:对酵母菌落或菌液直接进行裂解,裂解产物用于PCR扩增,无需提取基因组。

操作方便: PCR反应只需加入引物和模板即可进行扩增,反应结束后直接进行电泳。

扩增能力强:广泛适用于10 kb以内目标片段扩增。

 

 

实验案例

1.优异的扩增性能

酵母菌落为模板,扩增不同长度的DNA片段,PCR结束后电泳显示,2×Yeast Direct PCP Mix(with dye)可以高效特异地扩增长达8 kb的DNA片段。

 

 

实验流程

1.DNA提取

1.1吸取20~50 μL的1 × Yeast Lysis Buffer到1.5 mL离心管中,用无菌枪头或牙签蘸取适量的酵母菌落到离心管中,并搅拌混匀。

1.2 放置于95℃反应5~10 min。

1.3 取1~5 μL直接进行PCR反应。
 

2.PCR扩增体系配制

2×Yeast Direct PCR Mix (with Dye)完全解冻后上下颠倒混匀,于冰上配制如下反应体系:

组分

体积 

2 × Yeast Direct PCR Mix (with Dye)

25 μL

Primer F (10 μM)

2 μL

Primer R (10 μM)

2 μL

裂解产物

1~5 μL

ddH2O

Up to 50 μL

· 各组分使用前应充分混匀;

· PCR扩增体系中引物终浓度为0.2~0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可在0.1~0.5 μM范围内调整引物终浓度;

· 裂解产物加入量不应超过PCR反应总体积的1/10;

· 配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,然后瞬时离心将反应液集于管底。

 

3.PCR反应程序设定

 

Stage

程序 

温度 

时间 

循环 

Stage 1

预变性 95℃ 5 min 1 cycle

Stage 2

循环反应 b  95℃ 15 sec 35 cycles
55 ~ 72℃ 15 sec
72℃ 30 sec/kb

Stage 3

彻底延伸 72℃ 5 min 1 cycle

b.退火温度需要根据引物Tm值进行调整,一般设置为低于引物Tm值2~5℃即可。

 

4.PCR产物电泳

PCR扩增反应结束后直接取3~5 μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。本产品中已经预混有电泳缓冲液和染料,因此扩增产物无需再添加DNA Loading Buffer。

 

常见问题解答

Q1: 无扩增产物或扩增产量低

A1: 
(1)模板加入量不合适:裂解产物加入量不应超过PCR反应总体积的1/10,将裂解产物稀释10倍后再进行PCR扩增,或增大PCR反应体系;可尝试减少或增加裂解的酵母菌落/菌液浓度。
(2)PCR反应体系或程序出错:重新配制实验,确保PCR反应体系配制无误;确保反应程序设置无误。
(3)PCR程序不合适:增加PCR循环数以获得更多的扩增产物;降低PCR循环反应中的退火温度(每次降低3℃)。
(4)PCR引物错配严重:重新设计引物,并设置已纯化过的酵母基因组为模板的阳性对照。
(5)DNA释放效率差:延长95℃裂解时间至30min。
(6)DNA裂解混合液保存不当或保存时间过久,基因组DNA降解:裂解混合液可在4℃保存2-3天,或-20℃存放3个月。
(7)PCR试剂盒保存不当失去活性:2 × Yeast Direct PCR Mix (with Dye) 应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,短时间可在4℃存放。

 

Q2:95℃反应后裂解混合液变浑浊,且颜色偏白,该现象是否正常。

A2: 这是正常现象,不影响后续PCR扩增。

 

Q3:非特异性扩增

A3:
(1)引物浓度过高:降低引物浓度。
(2)PCR引物错配:重新设计引物,引物3'端最后一个碱基选择C或G;最后8个碱基应避免出现连续错配;引物3'端尽量避免出现发夹结构;引物Tm值控制在60℃-72℃之间,GC含量控制在40%-60%之间,且正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
(3)PCR扩增反应退火温度设置太低:提高退火温度(每次提高2℃)。
(4)PCR循环数过多:减少PCR循环数。
(5)PCR反应体系在室温下配制:冰上配制反应体系可显著降低非特异性扩增。

 

Q4:阴性对照出现目的条带

A4:
(1)PCR体系出现污染:逐个更换PCR反应体系中的每一个组分。
(2)操作工具污染:实验所有试剂或器材均应高温高压灭菌。

产品说明书

#24604 One Step Yeast Direct PCR Kit Manual

pdf

894.0KB

参考文献

COA查询

%{tishi_zhanwei}%

相关产品