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22112 miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

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22112 miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

  • 规 格:
    • 50 rxns

货 号:

22112


价 格:

¥ 0

¥ 600


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产品概述

产品描述

miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit(by stem-loop)是miRNA cDNA第一链合成的专用试剂盒(茎环法)。其中包含42℃, 2min的基因组DNA去除步骤,操作简便,可快速消除基因组DNA的干扰。本产品包含新一代逆转录酶ToLoScript III RTase以及针对miRNA的基因组去除与逆转录反应优化的最适缓冲液,从而有利于miRNA特异性逆转录产物的生成。建议使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal,#22204)进行cDNA产物后续定量。


 

 

产品组成

组分

22112 (50 rxns) 

 5 × miR gDNA Erase-Out Mix

100 μL

 10 × miR RT Buffer (stem) a

100 μL

 ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) b

50 μL

○ RNase-free ddH2O

1 mL

a.包含dNTP;

b.包含ToLoScript III RTase, RNase inhibitor。

 

 

保存条件

-20℃保存,≤ 0℃运输;

 

 

产品优势

优异的线性关系:在一定的模板区间内具有优异线性关系,模板含量最低检测限可低至pg级。

最适的反应体系:含有针对新一代逆转录酶ToLoScript III RTase,以及miRNA的基因组去除与逆转录反应优化的最适缓冲液,更有利于miRNA特异性逆转录产物的生成。

 

 

实验案例

以293T细胞的miRNA的10倍稀释梯度(1μg~10 pg)为模板,使用Tolobio#22112以及Supplier A,按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应,得到的cDNA使用2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix(Tolobio #22204)扩增hsa-miR-19a基因。实验结果显示,在一定的模板区间内,本产品相比于同类产品具有优异的线性关系。

 

 

实验流程

1.基因组DNA去除

1.1去除gDNA反应体系

室温融化5 × miR gDNA Erase-Out Mix、10 × miR RT Buffer (stem)及ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) 后置于冰上,在RNase-free离心管中配制如下反应体系:

组分

体积 

5 × miR gDNA Erase-Out Mix

2 μL

Total RNA/miRNA

x μL (10 pg ~1 μg)

RNase-free ddH2O

Up to 10 μL

用移液器吹打混匀后短暂离心。

1.2 去除gDNA反应程序

温度

时间

42℃

2 min

 

2.第一链cDNA合成

2.1第一链cDNA合成反应体系

组分

体积 

第1步的反应液

10 μL

Stem-loop Primer (2 µM)

1 μL

10 × miR RT Buffer (stem)

2 μL

ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem)

1 μL

RNase-free ddH2O

Up to 20 μL

用移液器吹打混匀后短暂离心。

2.2第一链cDNA合成反应程序:

温度

时间

25℃

5 min

50℃

15 min

85℃

2 min

逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。若短期内不进行下游实验,可-20℃保存。若需长期保存,建议分装后保存于-80℃,避免反复冻融。

常见问题解答

Q1: 如果要研究多个miRNA定量实验,是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录?

A1: 是的,针对每个miRNA都要设计一条茎环逆转录引物,一管反应中只能逆转一个miRNA(内参也是一样),即不同逆转录引物均需要分管逆转录。如一次性测试miRNA种类多,推荐使用加A尾法(Tolobio #22113,miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by tailing A)。

 

Q2: miRNA为什么要合成茎环引物?

A2:因为miRNA较短,如果使用普通逆转录和定量方法,无法设计定量引物,需要在逆转录阶段将cDNA延长。

 

产品说明书

#22112 miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit(by stem-loop) Manual

pdf

615.4KB

参考文献

COA查询

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