21502 2 × Magic Green Taq SuperMix
产品概述
产品描述
本产品包含特殊修饰的 Taq DNA Polymerase、dNTP 以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重复性。特殊修饰的 Taq DNA Polymerase 大大提高了扩增反应的特异性，扩增体系中加入的保护剂使得 2 × Magic Green Taq SuperMix 反复冻融后仍可保持稳定活性。本产品含有绿色染料，可在反应结束后可以不加Loading buffer直接进行电泳，方便快捷（需要将GelRed或SafeRed核酸染料加在琼脂糖凝胶中或上样样品中）。
产品优势
✽ 高性能的Taq DNA 聚合酶：核心组分Taq DNA Polymerase为抗体法修饰的热启动DNA聚合酶，极大地增强了反应的扩增效率和特异性。
✽ 优化的缓冲体系：有效抑制非特异性扩增和引物二聚体形成。
✽ 带绿色染料：反应结束后产物直接进行电泳，方便快捷。
✽ 适用范围广：可兼容多种复杂模板。
产品组分
| 组分 |
#21502-01 |
#21502-02 |
#21502-04 (100 mL) |
| ○ 2 × Magic Green Taq SuperMix |
10 × 1 mL |
5 × 21502-01 |
100 × 1 mL |
保存条件
-20℃储存，≤ 0℃运输；
实验案例
实验流程
1.在PCR管中配制如下反应体系
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组分 |
20 μL体系 |
50 μL体系 |
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Template DNA a |
x μL | x μL |
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Primer 1 (10 μM） |
1 μL | 2.5 μL |
|
Primer 2 (10 μM) |
1 μL | 2.5 μL |
|
2 × Magic Green Taq SuperMix |
10 μL | 25 μL |
|
ddH2O |
Up to 20 μL | Up to 50 μL |
a.以50 μL体系为例，推荐使用的模板量如下表：
|
模板类型 |
50 μL反应体系推荐用量 |
|
动植物基因组DNA |
0.1~1 μg |
|
大肠杆菌基因组DNA |
10~100 ng |
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质粒DNA |
0.1~10 ng |
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λDNA |
0.5~10 ng |
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cDNA b |
1~5 μL |
b.cDNA模板加入体积不宜超过 PCR反应总体积的 1/10。
2.反应程序
|
Stage |
程序 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
Stage 1 |
预变性 c | 95℃ | 3 min | 1 cycle |
|
Stage 2 |
循环反应 d | 95℃ | 15 sec | 30～35 cycles |
| 55~65℃ | 15 sec | |||
| 72℃ | 30 sec/kb | |||
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Stage 3 |
彻底延伸 | 72℃ | 5 min | 1 cycle |
c.如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可将预变性时间延长至5~10 min以提高预变性效果；
d.循环反应中的退火温度需要根据引物的Tm值进行调整，一般设置成低于引物Tm值3~5℃即可；对于复杂模板，需要调节退火温度和延长延伸时间来实现高效扩增。
e.延伸时间请根据目的片段长度参考以下方法进行设定：
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目的片段长度 |
建议延伸时间 |
|
＜1 kb |
10 sec/kb |
|
1 kb - 5 kb |
15 sec/kb |
|
5 kb - 10 kb |
30 sec/kb |
常见问题解答
Q1: 实验组无产物或少量产物。
A1：
(1)模板
粗提取模板中存在PCR抑制物影响实验结果，建议减少模板使用量或重新制备高纯度模板；
长期4℃放置、反复冻融会导致模板降解、断裂或开环，建议长期保存于-20℃或使用新鲜制备的模板；
模板GC含量过高或过低，建议摸索合适的退火温度；
若模板为cDNA，确保逆转录所用RNA的纯度及完整度。
(2)引物
检查引物是否因保存方式不当而降解，建议适当提高引物浓度，引物溶解后，短期使用4℃保存，长期不使用建议-20℃保存；
引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
(3)酶
因保存或运输不当导致酶活力降低或失活，建议提高酶的使用量或更换新酶重新进行实验。
(4)反应程序
检查延伸时间是否合适，摸索合适的退火温度，循环数增加至35-40个循环。
(5)反应体系
反应体系配制错误，建议重复实验；
反应体系中Mg2+的浓度不合适，Mg2+浓度过低可降低PCR产量甚至使PCR扩增失败，Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性，建议适当调整Mg2+浓度。
Q2：扩增产物有杂带或弥散条带。
A2：
(1) 引物
引物设计不合适。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体，引物浓度偏高，建议降低引物浓度至终浓度为0.2 μM，必要时需重新设计引物。
(2) 模板
模板浓度不准，导致加入模板不足或过量，可通过核酸胶电泳检查模板浓度是否准确，模板用量请参考反应体系推荐量调整。
模板不纯被污染，建议重新制备模板。
(3) 酶
酶量加入过多，减少酶使用量。
(4) 反应程序
提高退火温度；可间隔2℃设置至65℃；
出现比目的条带小的杂带，可通过提高退火温度，减少反应循环数改善；
出现比目的条带大的杂带，可通过缩短延伸时间，减少反应循环数改善。
Q3：空白对照出现扩增产物。
A3：
(1) 若扩增产物条带与目的片段大小一致，说明体系有污染
更换新的Mix、引物或ddH2O重复实验。在超净台配置反应体系，减少气溶胶污染。
(2)操作过程不规范，交叉污染
操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外，避免交叉污染。
(3) 使用巢式PCR方法减轻或消除靶基因受到空气中的小片段核酸污染。
参考文献
COA查询
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