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21502 2 × Magic Green Taq SuperMix

  • 产品图(23).png

21502 2 × Magic Green Taq SuperMix

  • 规 格:
    • 10×1 mL
    • 50×1 mL

货 号:

21502


价 格:

¥ 0

¥ 380


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产品概述

产品描述

本产品包含特殊修饰的 Taq DNA Polymerase、dNTP 以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,提高了检测通量和结果的重复性。特殊修饰的 Taq DNA Polymerase 大大提高 了扩增反应的特异性,扩增体系中加入的保护剂使得 2 × Magic Green Taq SuperMix 反复冻融后仍可保持稳定活性。本产品含有绿色染料,可在反应结束后直接进行电泳,方便快捷。

 

 

产品优势

高性能的Taq DNA 聚合酶:核心组分Taq DNA Polymerase为抗体法修饰的热启动DNA聚合酶,极大地增强了反应的扩增效率和特异性。

优化的缓冲体系:有效抑制非特异性扩增和引物二聚体形成。

带绿色染料:反应结束后产物直接进行电泳,方便快捷。

适用范围广:可兼容多种复杂模板。      

 

 

产品组分

组分

#21502-01 

#21502-02 

○ 2 × Magic Green Taq SuperMix

10 × 1 mL 

5 × #21502-01 

 

 

保存条件

-20℃储存,≤ 0℃运输;

 

 

实验案例

 

 

实验流程

1.在PCR管中配制如下反应体系

组分

20 μL体系

50 μL体系

Template DNA a

x μL x μL

Primer 1 (10 μM)

1 μL 2.5 μL

Primer 2 (10 μM)

1 μL 2.5 μL

2 × Magic Green Taq SuperMix

10 μL 25 μL

ddH2O

Up to 20 μL Up to 50 μL

a.以50 μL体系为例,推荐使用的模板量如下表:

模板类型

50 μL反应体系推荐用量 

动植物基因组DNA

0.1~1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10~100 ng

质粒DNA

0.1~10 ng

λDNA

0.5~10 ng

cDNA 

1~5 μL(加入体积不宜超过反应总体积的1/10)

b.cDNA模板加入体积不宜超过 PCR反应总体积的 1/10。

 

2.反应程序

Stage

程序

温度 

时间 

循环数 

Stage 1

预变性 c 95℃ 3 min 1 cycle

Stage 2

循环反应 d 95℃ 15 sec 30~35 cycles
55~65℃ 15 sec
72℃ 60 sec/kb

Stage 3

彻底延伸 72℃ 5 min 1 cycle

c.如果模板具有复杂二级结构或高GC区域,可将预变性时间延长至5~10 min以提高预变性效果;

d.循环反应中的退火温度需要根据引物的Tm值进行调整,一般设置成低于引物Tm值3~5℃即可;对于复杂模板,需要调节退火温度和延长延伸时间来实现高效扩增。

 

常见问题解答

Q1: 实验组无产物或少量产物。

A1:
(1)模板
粗提取模板中存在PCR抑制物影响实验结果,建议减少模板使用量或重新制备高纯度模板;
长期4℃放置、反复冻融会导致模板降解、断裂或开环,建议长期保存于-20℃或使用新鲜制备的模板;
模板GC含量过高或过低,建议摸索合适的退火温度;
若模板为cDNA,确保逆转录所用RNA的纯度及完整度。
(2)引物
检查引物是否因保存方式不当而降解,建议适当提高引物浓度,引物溶解后,短期使用4℃保存,长期不使用建议-20℃保存;
引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
(3)酶
因保存或运输不当导致酶活力降低或失活,建议提高酶的使用量或更换新酶重新进行实验。
(4)反应程序
检查延伸时间是否合适,摸索合适的退火温度,循环数增加至35-40个循环。
(5)反应体系
反应体系配制错误,建议重复实验;
反应体系中Mg2+的浓度不合适,Mg2+浓度过低可降低PCR产量甚至使PCR扩增失败,Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,建议适当调整Mg2+浓度。

 

Q2:扩增产物有杂带或弥散条带。

A2:
(1) 引物
引物设计不合适。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,引物浓度偏高,建议降低引物浓度至终浓度为0.2 μM,必要时需重新设计引物。
(2) 模板
模板浓度不准,导致加入模板不足或过量,可通过核酸胶电泳检查模板浓度是否准确,模板用量请参考反应体系推荐量调整。
模板不纯被污染,建议重新制备模板。
(3) 酶
酶量加入过多,减少酶使用量。
(4) 反应程序
提高退火温度;可间隔2℃设置至65℃;
出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,减少反应循环数改善;
出现比目的条带大的杂带,可通过缩短延伸时间,减少反应循环数改善。

 

Q3:空白对照出现扩增产物。

A3:
(1) 若扩增产物条带与目的片段大小一致,说明体系有污染
更换新的Mix、引物或ddH2O重复实验。在超净台配置反应体系,减少气溶胶污染。
(2)操作过程不规范,交叉污染
操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外,避免交叉污染。
(3) 使用巢式PCR方法减轻或消除靶基因受到空气中的小片段核酸污染。

 

 

产品说明书

#21502 Magic Green Taq Manual

pdf

657.0KB

参考文献

COA查询

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