iNature

CRISPRi是在CRISPR编辑方法的基础上开发的一种高效、简便的基因转录调控技术，其在细胞生物学和功能基因组学等领域有很好的应用前景。目前，CRISPRi对特定基因特定靶点的基因转录抑制效率往往是恒定的，不能对靶基因实现精确转录调控。而如何将CRISPRi系统改造成高效、可控、灵活并且特异性强的基因干扰技术是需要我们进一步深入研究的。2019年3月12日，中国科学院上海生命科学研究院赵国屏、王金研究课题组在Cell Discovery上在线发表了题为“CRISPR/ddCas12a-basedprogrammable and accurate gene regulation”的最近研究成果。

另外iNature还发现，王金研究团队还在Cell Research上发表了CRISPR相关的重要研究成果：上海生科院发现CRISPR-Cas12新活性，基因编辑又上升一个新高度。该研究发现可能将会用于潜在的生物编辑技术中，生物技术领域可能将迎来技术的革新。

该研究通过突变天然crRNA的DR基序来影响其介导的CRISPRi系统对靶基因转录抑制效率，通过选择不同DR基序，进而实现对靶基因进行不同效率的转录抑制，建立对靶基因精准调控的CRISPRi方法。文章利用gfp荧光报告系统和流式分选技术，建立不同DR基序的crRNA与其介导的基因转录抑制强度的对应关系。

文章还将筛选的介导不同转录抑制效率的crRNA DR数据库应用于DsRed基因和内源性基因，论证了精准调控CRISPRi方法同样适应于其他的基因。此外，文章还利用RNA凝胶迁移实验明确不同DR基序的crRNA与ddAsCas12a、靶DNA的亲和力关系，阐明不同DR基序影响CRISPRi转录抑制效率的分子基础。

CRISPR/ddCas12a系统对基因转录的精确调控

本文所建立的精准的CRISPRi方法有望应用于工业微生物的工程改造中，通过精准调控生物合成通路中关键基因的表达丰度，以减少宿主菌的代谢负荷，探索增加目标产物产量的潜在方案。此外，将大肠杆菌的实验结果和体外实验数据应用到人源细胞中，拟在哺乳动物细胞内建立精确的CRISPRi方法，可以进一步的促进我们对细胞生物学的研究。

原文链接：https://www.nature.com/articles/s41421-019-0085-y