产品中心
CC96123 BLR(DE3)
产品概述
产品描述
BLR来源于BL21，是recA重组酶缺陷型菌株，同时也是Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株。DE3表明宿主是λDE3的溶酶原，携带一个由lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因的染色体拷贝，因此适用于pET系列载体及其他T7启动子系列的载体。该菌株提升了质粒单体的产量，这有助于提升含有重复序列的质粒的稳定性，也能提高能够导致DE3噬菌体丢失的质粒的稳定性。经pUC19质粒转化检测，BLR (DE3)感受态细胞的转化效率可达107 cfu/μg DNA。
产品优势
✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 专门构建用于高水平重组蛋白表达
产品组分
|
组分 |
CC96123-01 |
CC96123-02 |
|
BLR(DE3)化学感受态 |
10 × 100 μL |
100 × 100 μL |
基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal lac ile dcm Δ(srl-recA)i306::Tn*10 (TetR) (DE3)
产品应用
BLR(DE3) 感受态细胞适用于高水平重组蛋白的T7表达。
实验流程
1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。
✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。
✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。
5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。
6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。
保存条件
-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。
相关参数
|
感受态类型 |
化学感受态 |
|
感受态菌株名称 |
BLR(DE3) |
|
种属 |
大肠杆菌 |
|
转化效率 |
高效率 (>1x10^7 cfu/µg pUC19 DNA) |
|
菌株用途 |
表达 |
|
应用特征 |
适用于高水平重组蛋白的T7表达 |
|
是否可进行蓝白斑筛选 |
否 |
|
菌株抗性 |
四环素 |
|
培养基 |
LB |
|
培养条件 |
37℃，有氧 |
|
诱导方法 |
- |
|
保存条件 |
-80℃ |
|
运输条件 |
干冰 |
|
包装规格 |
管装 (100 µL/管) |
|
出品公司 |
ToloBio |
常见问题解答
参考文献
COA查询
相关产品
