产品中心
25205 Tolo Basic RMA Kit
产品概述
产品描述
Tolo Basic RMA Kit 适用于以DNA或cDNA为模板的RMA (Recombinase-mediated amplification) 反应。RMA是一种常温恒温的核酸快速扩增技术，利用重组酶的特性帮助引物侵入DNA模板，并在聚合酶的作用下扩增靶标核酸。此方法具有灵敏度高、稳定性好、反应时间短、反应条件简单等优点。可与CRISPR检测体系结合提高靶标检测的特异性（推荐搭配LbCas12a：ToloBio #32108），也可采用琼脂糖凝胶电泳对Basic RMA扩增产物进行终点法检测。
产品组分
|
组分 |
#25205-01（100 rxns） |
|
● 2 × R Buffer |
1 mL |
|
● 10 × E Buffer |
200 μL |
|
● Core Mix |
300 μL |
|
● MgAc(280 mM) |
100 μL |
|
○ dNTPs(25 mM) |
40 μL |
保存条件
-20℃保存，≤ 0℃运输；并尽量避免反复冻融。
实验流程
1.按下表制备每份样本混合液
|
组分 |
体积 |
| 2 × R Buffer |
10 μL |
| 10 × E Buffer |
2 μL |
|
dNTP (25 mM) |
0.4 μL |
| Core Mix |
3 μL |
| 正向引物 (20 µM) |
0.5 μL |
| 反向引物 (20 µM) |
0.5 μL |
| Template DNA |
x μL |
| ddH2O |
Up to 19 μL |
· 请将 2 × R Buffer 平衡至室温后再使用，并完全混匀，否则会影响实验。
· 当 Target DNA 模板的浓度高于 10 3 copies/μL 时，推荐 Target DNA 加样量为 1 μL，阴性对照可用 ddH2O 代替 Target DNA 模板。
· 配制完成后请将上述体系充分振荡混匀后离心。
2.对于每份样本，在反应管盖内侧加入 1 μL 的 MgAc，小心盖紧管盖，短暂离心，轻微振荡涡旋后，再次短暂离心。
· 振荡是为了使体系均匀分散，但振荡时长不应超过 5 s；扩增反应依靠 MgAc 来激活，因此加入 MgAc 后应尽快上机孵育，以避免产生非特异扩增。
3.将反应管放置于提前预热好的恒温仪中（37～42℃）孵育 20～30 min。
· 若 DNA 模板浓度低，可在反应 4 min 后取出反应管，短暂振荡离心后，再继续孵育。
4.孵育结束后，在产物中添加 DNA Loading Buffer，进行琼脂糖凝胶电泳。
· 孵育结束后，可 85℃处理 5 min 终止反应；
注意事项
2. 在不同的核酸提取方法下，所提取的样本 DNA 含量和纯度会有差异，从而影响扩增效率（影响因素请查阅 PCR 抑制剂：乙醇、苯酚、血红素等）。
3. 本产品仅供科研使用。
常见问题解答
参考文献
COA查询
相关产品
