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22113 miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by tailing A)

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22113 miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by tailing A)

  • 规 格:
    • 25 rxns

货 号:

22113


价 格:

¥ 0

¥ 3950


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产品概述

产品描述

miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by tailing A)是miRNA cDNA第一链合成的专用试剂盒(加尾法)。只需一步操作,即可完成加尾反应和逆转录反应。适用于miRNA或总RNA模板,在Poly A Polymerase (PAP)的作用下,在模板3'-末端加Poly (A),随后进行加尾法逆转录反应。

本试剂盒中包含专为miRNA加尾法逆转录定向改造的ToLoScript III RTase和PAP,配以优化的缓冲体系,在具有高灵敏度的同时,最大限度降低pre-miRNA的逆转录,保证后续结果的稳定性和可重复性。此外,本试剂盒中已提供了后续cDNA定量需要的qPCR反向引物,方便后续的实验流程。推荐使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal,#22204)进行cDNA产物后续定量。

 

 

产品组成

组分

22113 (25 rxns) 

● 2 × miR RT Buffer (tailing) a

250 μL

 ToloScript III miR Enzyme Mix (tailing) b

50 μL

○ RNase-free ddH2O

1 mL

 Universal Reverse Primer for qPCR (10 μM) c

250 μL

a.包含dNTP、加尾法逆转录引物;

b.包含ToLoScript III RTase、RNase inhibitor;

c.qPCR通用反向引物 (用于后续cDNA定量分析)

 

 

保存条件

-20℃保存,≤ 0℃运输;

 

 

产品优势

便捷的实验操作:只需一步操作,即可完成加尾反应和逆转录反应。

优异的逆转录性能:含有专为miRNA加尾法逆转录定向改造的ToLoScript III RTase和PAP,配以优化的缓冲体系。

较高的逆转录特异性:专用的酶与最适的缓冲体系结合,从而能够最大限度降低pre-miRNA的逆转录,保证后续结果的特异性和可重复性。

适用范围较广:不仅适用于miRNA而且也适用于总RNA模板。

 

实验案例

以293T miRNA为模板(30ng/μl),使用ToloBio#22113以及其他品牌相关产品,按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应,将得到的cDNA分别在六种引物体系(H10/11/15/16/17/19)中进行qPCR定量分析。结果显示,ToloBio #22113在不同引物体系中,逆转录效率优于同类产品。


以293T miRNA浓度梯度稀释为模板,使用ToloBio#22113以及其他品牌相关产品,按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应,对逆转录反应得到的cDNA进行qPCR定量分析,可以看到,使用Tolobio #22113逆转录miRNA后qPCR检测得到的溶解曲线单峰且峰形优异,特异性更高,且定量效果较好.

 

 

实验流程

1.在RNase-free离心管中配制如下反应体系

组分

体积 

2×miR RT Buffer (tailing)

10 μL

ToloScript III miR Enzyme Mix (tailing)

2 μL

Total RNA/miRNA

x μL

RNase-free ddH2O

Up to 20 μL

用移液器吹打混匀后短暂离心。

 

2.按下列反应程序进行逆转录反应

温度

时间

37℃

60 min

85℃

5 min

逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。为避免逆转录体系对qPCR反应的抑制,可将产物稀释10~1000倍后使用。若短期内不进行下游实验,可-20℃保存。若需长期保存,建议分装后保存于-80℃,避免反复冻融。

 

常见问题解答

Q1: #22113这款试剂盒是否含有RNA酶抑制剂?

A1: 是。

 

Q2: 后续搭配的定量试剂是什么?

A2:  #22204是目前测试中表现最好的定量试剂。

 

Q3: 投入total RNA,所有的RNA都会被加尾吗?

A3: 是的,均会进行无差别加尾。

 

Q4: #22113这款试剂盒是否既可逆转miRNA,又可以进行常规逆转录?

A4: 该试剂盒是专门针对miRNA逆转录开发的试剂盒,不建议进行常规逆转录(逆转引物有差别,且该逆转录酶是经过定向改造,对较长的RNA逆转效率低)。

 

产品说明书

22113-miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit

pdf

359.7KB

参考文献

COA查询

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