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36201 Tolo RNAclean Kit (Magnetic Beads)
产品概述
产品描述
TOLO RNAclean Kit 采用磁珠法分离纯化的原理，使用新型的高性能磁珠，配合优化的缓冲体系，可便捷的从样品中进行 RNA 的分离与纯化，并有效去除蛋白质、无机盐离子和其它杂质等。该试剂盒特别适合体外转录 RNA 样品的纯化，可快速、高效地去除模板 DNA，同时保留 RNA 的完整性和纯度。此外，还具有高通量、易于操作等优点。纯化的产物 RNA 可用于 CRISPR 实验、cDNA 合成等。
产品组分
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Part A：DNA模板去除试剂（-20℃保存） |
36201-01（25 T） |
36201-02（50 T） |
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● 2 × DNase Ⅰ Buffer |
625 μL | 1250 μL |
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● DNase Ⅰ |
100 μL | 200 μL |
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○ DEPC-treated Water |
250 μL | 250 μL |
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Part B：纯化磁珠（4℃保存） |
3620F-01（25 T） |
3620F-02（50 T） |
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● Magnetic Beads a |
625 μL | 1250 μL |
a. 本产品中 Part B 组分（纯化磁珠，#3620F）与 Part A 组分保存条件不同，因此 Part B 组分需单独运输！
保存条件
Part A 组分-20℃保存，有效期 1 年。
需自备的实验物品
- PCR 仪
- 无水乙醇
- 异丙醇
- 无核酸酶水
- 96 孔磁力架
- 96 孔板或 PCR 8 联排管
- 移液器及吸头
实验流程
1.按照下表配制 30 μL 的 DNase Ⅰ反应液加入到 20 μL 的转录产物中，以去除转录体系中的 DNA 模板。
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组分 |
体积 |
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2 × DNase Ⅰ Buffer |
25 μL |
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NTP mix |
4 μL |
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DEPC-treated Water |
1 μL |
· DNase Ⅰ反应体系条件：37℃，30 min。
2. 转录产物纯化
2.1 首先将磁珠从 4℃冰箱中取出，在室温中放置约 30 min，使其温度平衡至室温。颠倒或涡旋振荡使磁珠充分混匀，吸取 25 μL 磁珠和 50 μL 异丙醇加入到 50 μL 待纯化的 RNA 样品中，用移液器吹打充分混匀。
2.2 室温孵育 5 min，使 RNA 结合到磁珠上。
2.3 将样品置于磁力架上 5 min，待溶液澄清后，小心移除上清。
2.4 保持样品置于磁力架上，加入 200 μL 新鲜配制的 80% (v/v)乙醇，漂洗磁珠，室温孵育 30 s，小心移除上清。
注：漂洗时使用的 80% (v/v)乙醇需要使用 Nuclease-free water 新鲜配制，配制方法举例如下：分别量取8 mL 无水乙醇和 2 mL Nuclease-free water，混匀后可得 10 mL 80% (v/v)乙醇。
2.5 重复步骤 4，共漂洗 2 次。
2.6 保持样品始终处于磁力架上，开盖空气干燥磁珠 5 min。
注：磁珠开盖晾干时要避免过分干燥，如果磁珠出现龟裂，则提示磁珠过分干燥，此时 RNA 的洗脱效率会降低。
2.7 将样品从磁力架上取出，加入 50 μL Nuclease-free water，用移液器吹打以充分混匀，室温静置 5 min。
2.8 将样品置于磁力架 5 min，待溶液澄清后，小心转移上清至一个新的 Nuclease-free PCR 管中。
注意事项
1. 本试剂盒中的 Part B 组分（纯化磁珠，#3620F）单独运输。磁珠保存条件为 2-8℃，严禁冻存和高速离心操作。
2. 由于 DNaseⅠ对不同 DNA 序列的消化能力存在差异，如果纯化完成后仍然存在残留模板 DNA，可以再次进行 DNaseⅠ处理，然后再次纯化。
3. 实验过程应选用无核酸酶的枪头和离心管。
4. 本产品仅供科研使用。
常见问题解答
参考文献
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