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21411 2 × FastTaq Premix (with dye)

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21411 2 × FastTaq Premix (with dye)

  • 规 格:
    • 5×1 mL
    • 10×1 mL
    • 50×1 mL

货 号:

21411


价 格:

¥ 0

¥ 250


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产品概述

产品描述

2 × FastTaq Premix (with dye)是一种包含PCR反应所需FastTaq DNA聚合酶、buffer、dNTP Mixture以及稳定剂等组分的预混液。使用时,只需在本产品中加入模板和引物即可进行PCR反应,大大简化了操作过程,降低了PCR操作过程中污染的风险。针对片段长度不超过1.5 kb的目标PCR产物,本产品支持1 sec超快PCR延伸程序 (72℃延伸程序仅需设置为1 sec)。

 

 

产品组分

组分

21411-01 

21411-02 

21411-03 

○ 2 × FastTaq Premix(with dye)

5 × 1 mL 5 × 21411-01 10 × 21411-01

· 预混液置于-20℃保存,避免反复冻融。

· 组分中已包含染料,扩增产物可直接用于电泳检测。

 

 

实验流程

1.冰上配置反应体系

组分

体系 

Template DNA a

x μL

Primer 1 (10 µM)

2 μL

Primer 2 (10 µM) 

2 μL

2 × FastTaq Premix(with dye) 

25 μL

ddH2O

Up to 50 μL

· FastTaq DNA聚合酶在室温下也有一定的反应活性,在冰上配制可以减少准备过程中发生的非特异扩增,提高反应的特异性。

a.针对不同来源或类型的模板,所需的反应浓度不同,下表为50 µL反应体系推荐模板使用量:

 

模板类型

推荐模板用量 

动植物基因组DNA

0.1~1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10~100 ng

质粒DNA

0.1~10 ng

λDNA

0.5~10 ng

cDNA

1~5 μL(加入体积不宜超过反应总体积的1/10)

 

2.反应程序

Stage

程序 

温度 

模板起始量 

循环数

Stage 1

预变性 95℃ 5 min 1 cycle

Stage 2

循环反应 95℃ 30 sec 30-35 cycles
56℃ 30 sec
72℃ 30 sec/kb或1 sec(1 sec延伸仅适用于1.5 kb的目标片段)

Stage 3

彻底延伸 72℃ 5 min 1 cycle

· 退火温度需根据引物和模板实际的GC含量调整

 

引物设计

1. 引物长度约 15-30 个碱基,引物 3'端最后一个碱基最好为 G 或者 C。

2. 引物的 GC 含量控制在 40%-60%之间,Tm 值调整至 55~65℃为佳,若模板本身 GC 含量过高或过低,30%-80%也可。

3. 上下游引物 GC 含量不宜相差过大,Tm 值相差不超过 1℃为佳,引物与模板非配对序列,不应参与引物 Tm 值计算。

4. 引物中四种碱基(A、G、C、T)随机分布,可降低引物与模板相似性,避免出现聚嘌呤或聚嘧啶。

5. 引物自身及引物之间不应存在连续的互补序列(5 个碱基),引物 3'端避免出现发夹结构。

6. 引物设计好后,可对其进行 blast 检测确定是否有非特异性扩增,NCBI 或 SnapGene 等可实现该功能。

7. 各种模板的引物设计难度不一,对于模板本身比较困难的(如 GC 含量或 AT 含量过高),引物设计应退而求其次,尽量满足以上条件即可。

 

 

保存条件

-20℃储存,≤ 0℃运输;

 

 

 

常见问题解答

产品说明书

#21411 2× FastTaq Premix (with dye)-V15.1.1

pdf

572.6KB

参考文献

COA查询

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